Abstract FR:

Chez l'homme, les protéines de la famille de l'inter-alpha-trypsine inhibiteur (ITI) sont synthétisées dans le foie par quatre gènes différents et sont structurées à partir de différents assemblages des formes matures des précurseurs polypeptidiques : trois chaînes lourdes H1, H2, H3 et une chaîne légère L. Leurs taux sériques varient en fonction de l'état inflammatoire. Il a été montré que les protéines de cette famille assurent la stabilité de la matrice extracellulaire. La première partie de notre étude porte sur la régulation de l'expression des gènes de l'ITI pendant le processus inflammatoire. A l'aide du modèle cellulaire d'hépatome HepG2 et des sondes d'ADNc H1, H2, H3 et L, nous avons pu analyser les variations quantitatives des transcrits de l'ITI sous l'influence de médiateurs de l'inflammation. Les résultats obtenus indiquent que l'interleukine-6 (IL-6), l'un des médiateurs majeurs de l'inflammation, a un effet stimulant sur le taux des ARNm H1 et H3 et un effet inhibiteur sur le taux des ARNm H2 et L. Ces variations sont fonction de la concentration d'IL-6 et de la durée d'induction ; elles ne sont pas observées en présence d'inhibiteurs de la transcription tels que l'actinomycine D. Ces résultats ainsi que le dosage in vitro de la transcription des gènes l'ITI permettent d'affirmer que l'IL-6 augmente l'activité transcriptionnelle des gènes ITI H1 et ITI H3 et diminue celle des gènes ITI H2 et ITI L. L'IL-6 n'a aucun effet sur la durée de vie des ARNm de H3 et L, mais stabilise les ARNm de H2. Ces résultats montrent que l'IL-6 régule l'expression des gènes de l'ITI de manière différentielle. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons réalisé une étude structurale et fonctionnelle de la région promotrice du gène ITI H3. Nous avons séquencé 3000 paires de bases en amont du site d'initiation de la transcription du gène ITI H3. Des fragments délétés dans cette région ont été clonés dans un vecteur d'expression en amont du gène indicateur luciférase. La transfection transitoire des cellules HepG2 en culture par ces constructions révèle une activité promotrice importante qui est modulée par la présence ou l'absence d'IL-6. Un élément cis-régulateur de classe I de réponse à l'IL-6 a pu être localisé en position -1331 par rapport au site d'initiation de la transcription du gène ITI H3. L'analyse des interactions ADN-protéines dans cette région, par retardement sur gel, révèle la fixation de facteurs nucléaires de la famille C/EBP sur cet élément. L'utilisation d'antisérums dirigés contre les facteurs nucléaires C/EBP alpha et C/EBP beta montre leur implication dans la régulation de l'expression du gène ITI H3. Lors de l'induction des cellules HepG2 par l'IL-6 le facteur C/EBP alpha serait déplacé par la présence en excès du facteur C/EBP beta. Ces résultats suggèrent que ce dernier constitue le facteur transactivateur de la régulation positive de l'expression du gène ITI H3 par l'IL-6. L'ensemble de ces résultats nous a permis de caractériser l'élément cis et les facteurs trans, importants pour l'activation transcriptionnelle du gène ITI H3 par l'IL-6.