Abstract FR:

Des travaux anterieurs menes au laboratoire avaient permis d'identifier une region de la nitrate reductase (nr) de tabac qui est requise pour la regulation post-traductionnelle de l'enzyme a l'obscurite par phosphorylation. Il s'agit d'une region de 56 acides amines, situee dans la partie interne du domaine n-terminal de la proteine. Afin de determiner avec plus de precision quels residus, parmi cette sequence de 56 acides amines, sont plus particulierement impliques dans l'inactivation de l'enzyme, nous avons introduit deux deletions dans le domaine n-terminal de la nr de tabac, correspondant a des regions conservees chez les plantes superieures : une deletion d'un motif acide (13 aa) et une deletion d'un residu serine conserve (4 aa). Ces deux constructions ont ete introduites dans des mutants de nicotiana plumbaginifolia et d'arabidopsis thaliana deficients pour l'activite nr. L'etude de l'inactivation des proteines nr mutees exprimees dans ces plantes transgeniques a permis de montrer que le motif acide (13 aa) est necessaire a l'inactivation de la proteine par l'obscurite chez n. Plumbaginifolia, mais pas chez a. Thaliana. De plus, il pourrait correspondre a un site de reconnaissance pour une caseine kinase ii (ckii), qui, en phosphorylant la proteine, contribuerait a sa degradation par une protease. D'autre part, la technique du double-hybride dans la levure a ete utilisee afin de rechercher, dans une banque d'a. Thaliana, des proteines capables d'interagir avec le domaine n-terminal de la nr de tabac. Un clone presentant une interaction specifique avec la nr et codant pour une protease a cysteine d'a. Thaliana (proteine rd19) a ete isole. Enfin, la specificite de substrat des proteines kinases de la nr d'epinard, ainsi que l'inactivation de proteines nr mutees exprimees dans la levure, ont ete etudiees au departement de biochimie de l'universite de dundee (ecosse), dans le cadre d'une collaboration etablie avec l'equipe du pr. C. Mackintosh.