thesis

Nucleoside diphosphate kinase de dictyostelium discoideum : clonage de l'adnc et etude biochimique de la proteine

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Jan. 1, 1992

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Institution:

Paris 6

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Les nucleosides diphosphates (ndp) kinases sont des enzymes ubiquitaires qui catalysent la synthese des nucleosides triphosphates. L'adnc codant pour la ndp kinase de dictyostelium discoideum (d. D. ) a ete isole par criblage fonctionnel. Puis l'enzyme, exprimee chez e. Coli, a ete purifiee a homogeneite, ses proprietes biochimiques ont ete comparees a celles de l'enzyme partiellement purifiee a partir de cellules de d. D. Au stade vegetatif. Leurs proprietes analogues indiquent que la ndp kinase de d. D. Ne subit pas de modifications post traductionnelles susceptibles de modifier son activite. Contrairement a l'enzyme humaine, constituee de deux types de sous-unites, la proteine de d. D. Est un homohexamere de 103 kda. La structure hexamerique de l'enzyme est confirmee par les premiers resultats de l'etude de la structure cristallographique. Son mecanisme reactionnel est de type ping-pong avec formation d'un intermediaire phosphoryle sur l'histidine 122. Bien que le taux d'arnm, tres eleve au stade vegetatif, diminue des le debut du developpement pour atteindre un niveau tres bas, le taux de proteine ainsi que l'activite ndp kinase decroissent peu au cours du cycle. La sequence de la ndp kinase de d. D. Est similaire a 75% avec les produits de deux genes: nm23, propose comme suppresseur du potentiel metastatique de cellules tumorales chez les mammiferes et awd, implique dans l'embryogenese de la drosophile. Cette similitude a permis d'attribuer une fonction a ces proteines et suggere que les ndp kinases, pourraient intervenir dans le controle de processus tels que le developpement ou la proliferation tumorale