Abstract FR:

Les glutamyl- et prolyl-arnt synthetases (ers, prs) des eucaryotes superieurs forment une proteine multifonctionnelle, la gluprolyl-arnt synthetase (eprs), associee a un complexe multienzymatique incluant 7 autres synthetases. Les domaines synthetasiques de l'eprs sont relies par des elements repetes en tandem : les motifs whep. Ces motifs, unitaires ou repetes, repertories du nematode c. Elegans a l'homme, sont exclusivement associes a des aminoacyl-arnt synthetases. La forte conservation de leurs sequences suggere qu'une fonction essentielle leur est devolue. Cette these rapporte la caracterisation structurale et fonctionnelle des motifs whep, identifies a un nouveau motif proteique de liaison a l'arn. Les motifs whep de l'eprs de hamster ont ete clones et leurs sequences comparees a l'ensemble des motifs whep connus. Chez c. Elegans, l'ers et la prs, qui sont des entites distinctes, presentent 6 motifs whep ou un seul, respectivement en position c- ou n-terminale. L'etude phylogenetique moleculaire des motifs whep suggere que la formation de l'eprs resulte de la fusion des genes d'ers et de prs du type c. Elegans par recombinaison genetique entre sequences homologues specifiant des motifs whep. Les trois motifs whep du domaine central de l'eprs de hamster ont ete exprimes chez e. Coli soit ensemble, soit individuellement. Ce sont des entites discretes, monomeriques ; aucune tendance a l'auto- ou l'inter-association de ces motifs n'a ete observee. Par dichroisme circulaire, les motifs isoles revelent, tout comme les domaines repetes, une structuration -helicoidale. Chaque motif peut donc etre identifie a un domaine structural autonome. Les residus strictement conserves entre ces motifs sont regroupes sur une face d'une helice-, potentielle zone d'association. Des partenaires proteiques ou nucleiques ont ete recherches. Des aptameres arn ont ete isoles par chimie combinatoire associee a un crible genetique. Ils pourraient former une structure tige/boucle, les nucleotides conserves de la boucle constituant le site arn de reconnaissance des motifs whep. Ce resultat s'inscrit dans la definition de nouveaux motifs d'association acide nucleique-proteine impliques dans l'etablissement d'un reseau d'interactions cellulaires conduisant a la compartimentalisation de l'appareil de traduction.