Abstract FR:

Les transporteurs a atp binding cassette sont caracterises par une organisation en quatre domaines : deux domaines hydrophobes qui forment un site de reconnaissance de substrat, et deux domaines hydrophiles conserves qui hydrolysent l'atp, source d'energie du transport. Ces transporteurs servent a l'import ou l'export de substrats varies en taille et nature chimique et jouent un role important en sante humaine. Mais la comprehension du mecanisme moleculaire du transport est encore imparfaite. Nous nous sommes interesses au role des interactions proteine-proteine dans le systeme modele du complexe de membrane interne du systeme de transport du maltose d'escherichia coli. Ce transporteur est constitue de quatre polypeptides : malf et malg, les domaines hydrophobes, qui servent a l'accrochage de deux copies de malk, les domaines hydrophiles. Nous avons etudie par mutagenese dirigee le role fonctionnel d'une boucle cytoplasmique conservee de malf et malg, la region eaa. Nous avons montre que cette region sert a l'interaction avec un domaine dit helical de malk. En incubant la proteine malk purifiee avec des vesicules a la topologie inversee contennant malf et malg, nous avons reconstitue un transporteur fonctionnel. En utilisant cette approche nous avons montre que la fixation de l'atp module l'interaction entre malk et malf-malg. La fixation de l'atp induit un changement de conformation de malk, et un site de son domaine helical devient accessible a la proteolyse. Ce site est protege de l'attaque d'une protease par la presence de malf-malg, suggerant de nouveau que ce domaine est implique dans les interactions avec malf-malg. Enfin, nous avons montre que l'insertion dans la membrane de malf surproduite sans malg induit une reponse de stress extracytoplasmique. Une grande boucle periplasmique de malf en est la cause et la presence de malg abolit cette induction, suggerant que l'interaction entre malf et malg joue un role important dans le repliement correct de malf.