Abstract FR:

La 2,3-bisphosphoglycerate mutase (bpgm) est une enzyme erythrocytaire multifonctionnelle assurant la production de l'effecteur majeur de l'hemoglobine, le 2,3-diphosphoglycerate. Afin d'etudier les relations structure/fonction de la bpgm, nous avons clone l'adnc de cette enzyme et l'avons introduit dans un vecteur d'expression procaryote. Cette construction produit, dans e. Coli, une proteine bpgm dont les activites enzymatiques sont identiques a celles de la proteine humaine native. Par mutagenese dirigee, nous avons produit deux proteines deletees des 7 et 11 acides amines c-terminaux et enzymatiquement inactifs, ce qui indique l'importance fonctionnelle de la partie c-terminale de la bpgm. Nous avons ensuite clone le gene humain codant la bpgm et etudie les elements intervenant dans la regulation de l'expression de ce gene. Par transfection, nous avons montre qu'un fragment d'adn contenant 190 bases en 5 du site d'initiation, etait transcriptionnellement actif dans les cellules erythroides et non erythroides. L'etude des interactions proteines-adn a montre que ce fragment avait deux sequences pouvant fixer des facteurs nucleaires; la premiere situee a -90 fixe le facteur ubiquitaire nfe, la seconde situe en -175 fixe a la fois un facteur ubiquitaire ccaat et le facteur erythrocytaire nf-e1. Une mutation ponctuelle supprimant la fixation du facteur ccaat tout en maintenant la fixation de nf-e1, entraine une diminution importante de l'activite transcriptionnelle du promoteur bpgm quelque soit le type cellulaire, ce qui indique que le facteur ccaat semble intervenir sur le niveau d'expression du gene bpgm. En revanche, une mutation ponctuelle supprimant la fixation du facteur nfe entraine la disparition de l'activite transcriptionnelle de ce promoteur uniquement dans les cellules erythroides