Abstract FR:

La thrombospondine (tsp-1) est contenue dans les granules alpha des plaquettes. Au cours de l'activation plaquettaire, la tsp-1 est secretee et se fixe a la membrane ou elle est impliquee dans la formation des macroagregats de plaquettes. Le mecanisme de la liaison de la tsp-1 aux plaquettes est complexe et mal compris ; en particulier l'identite de ses recepteurs membranaires n'est toujours pas connue. Dans la premiere partie de nos etudes, nous avons caracterise la liaison de la tsp-1 purifiee aux plaquettes. Nous avons mesure 2200 sites de liaison specifiques par cellule sur les plaquettes activees a la thrombine. Comparee a l'expression de la tsp-1 endogene, la liaison de la tsp-1 purifiee est beaucoup plus faible, suggerant que la majorite des sites est occupee par des molecules de tsp-1 endogene. La liaison de la tsp-1 peut se produire independamment de la presence du fibrinogene, de gpiib-iiia et gpiv, et une majeure partie de la tsp-1 liee aux plaquettes activees est associee au cytosquelette d'actine, selon un processus qui n'implique pas qu'elle soit liee a la fibrine, a gpiib-iiia ou gpiv. Nous avons ensuite montre que l'expression de la tsp-1 endogene est inhibee par un anticorps monoclonal dirige contre le domaine nh2 terminal de la molecule. L'anticorps inhibe la liaison de la proteine purifiee au fibrinogene et a gpiv, et l'agregation plaquettaire, demontrant l'importance fonctionnelle de ce domaine de la tsp-1 dans son mecanisme d'interaction avec les plaquettes. Dans la seconde partie de nos etudes consacree a l'identification de constituants plaquettaires capables de lier la tsp-1, nous avons mis en evidence une interaction specifique et de haute affinite (kd: 6,6 nm) entre l'alpha-actinine et la tsp-1 in vitro. La possibilite que cette interaction moleculaire se produise dans les plaquettes a ete exploree dans la derniere partie de notre travail. Par des etudes ultrastructurales, nous avons identifie la presence de l'alpha-actinine dans les granules alpha et montre que durant l'activation plaquettaire, l'alpha-actinine est secretee simultanement a la tsp-1 vers la surface membranaire, ou la formation de complexes moleculaires entre les deux proteines est demontree