Abstract FR:

La production de prostaglandines e2, mediateurs lipidiques majeurs de l'inflammation articulaire, est le resultat de deux activites enzymatiques successives, la phospholipase a2 (pla2) et la cylooxygenase (cox). Pour chacune de ces activites, il existe au moins deux proteines differentes impliquees dans la synthese des icosanoides. Pla2 secretee de type ii et pla2 cytosolique d'une part, cox-1 et cox-2 d'autre part. L'expression des genes de ces differentes proteines peut etre regulee par des cytokines et facteurs de croissance. Nous avons voulu identifier les enzymes qui participent a la formation des prostaglandines e2 (pge2) induites par les cytokines proinflammatoires (il-1 et tnf) dans les chondrocytes articulaires de lapin en culture primaire. Nous avons montre l'existence d'une synergie il-1/tnf sur la synthese de pge2. L'il-1 induit fortement l'expression de la pla2 secretee de type ii en terme d'arnm et d'activite enzymatique mais ne modifie pas celle de la pla2 cytosolique. L'il-1 augmente l'expression de la cox-2 en terme d'arnm et d'activite. Le tnf seul ne modifie ni l'expression de la pla2 secretee de type ii, ni celle de la pla2 cytosolique. Le tnf seul augmente l'expression de l'arnm de la cox2 et, en presence d'il-1 augmente l'activite cox. Des resultats anterieurs du laboratoire avaient montre une induction par il-1 et une inhibition par igf-i (insulin-like growth factor) de l'expression du gene de la pla2 secretee de type ii. Nous avons etudie d'une part l'effet d'igf-1 sur la production de pge2 et d'autre part les mecanismes moleculaires qui interviennent dans la regulation de l'expression du gene de la pla2 secretee de type ii. Nous avons montre que l'igf-i inhibe fortement la synthese de pge2 et l'activite de la pla2 secretee de type ii induites par il-1 sans modifier l'activite pla2 cytosolique. Une cinetique d'expression de la pla2 secretee par northern-blot, a montre une induction d'expression a partir de 4h de stimulation par il-1 (10 ng/ml), atteignant son maximum vers la 14eme heure. Afin de determiner les mecanismes d'induction de l'expression du gene, un calcul du taux de transcription du gene a ete realise par experiences de run-on. Les chondrocytes traites durant 24h avec l'il-1 ont montre une induction de la transcription du gene de la pla2 secretee de type ii de 4 fois, alors que le taux de transcription du gene de la pla2 cytosolique n'etait pas modifie. L'igf-i n'a eu aucune influence sur le taux de transcription de la pla2 secretee et de la pla2 cytosolique, en presence ou non d'il-1. La demi-vie des arnm de la pla2 secretee de type ii en presence d'il-1 a ete estimee a 92h, demi-vie tres longue suggerant un effet stabilisant de l'il-1. L'addition d'igf-i a aboutit a une diminution dramatique de la demi-vie (12h) suggerant un effet destabilisant de l'igf-i. En revanche, l'igf-i n'a pas eu d'effet sur l'initiation de la traduction de la pla2 secretee induite par il-1 (etude differentielle des fractions polysomales). Ces differents resultats montrent une regulation differentielle de l'il-1 et de l'igf-i sur la pla2 secretee de type ii, le premier agissant au niveau transcriptionnel et probablement post-transcriptionnel alors que le second agit uniquement au niveau pose transcriptionnel en destabilisant l'arnm de la pla2 secretee de type ii.