Abstract FR:

Ce travail porte sur l'analyse de domaines fonctionnels de la proteine prna, indispensable pour l'utilisation de la proline par aspergillus nidulans. C'est un regulateur positif specifique, appartenant a la classe des facteurs a complexe binucleaire a zinc. Le but de ce travail etait d'analyser la fonctionnalite des differents domaines de la proteine, predits par l'analyse de la sequence. Un grand nombre d'alleles de prna ont ete sequences. Je me suis concentree sur l'analyse moleculaire du mutant prna27 situe dans la region centrale. Une mutagenese aleatoire de ce mutant a permis l'identification des suppresseurs intrageniques se situant dans une region encore non caracterisee, appellee region b. La deuxieme partie de cette these presente l'analyse de la sequence d'adressage nucleaire de prna. Une analyse fine de ce nls a permis d'etablir qu'il s'agit d'une sequence tripartite, comprenant trois groupements d'acides amines basiques dont le troisieme fait partie du domaine binucleaire a zinc. J'ai pu faire la distinction entre une localisation nucleaire, dependante de la sequence tripartite et une retention au noyau, necessitant le domaine de dimerisation. Le role de groupements basiques de ce signal tripartite a ete etudie grace a des mutants et des proteines de fusions contenant differents fragments de la proteine prna et la proteine verte fluorescente. La capacite de differentes sequences a induire le transport nucleaire a ete testee par microscopie de fluorescence. Une fusion de prna entiere avec la proteine verte a ete effectuee. Cette proteine de fusion est fonctionnelle et sa localisation ne depend pas de la presence du co-inducteur dans le milieu. La localisation de la proteine entiere est differente de celle de proteines de fusion contenant la partie n-terminale de prna. Sa sous-localisation est coherente avec la coloration au dapi. La derniere partie de ce travail est consacree a l'etude de l'homologue de l'importine alpha chez aspergillus nidulans. La comparaison de cette proteine avec les importines d'eucaryotes superieurs met en evidence une tres grande conservation de la sequence. Je presente ici le sequencage du gene de l'importine potentielle d'aspergillus et l'analyse de sa sequence proteique.