Construction de vecteurs d'expression codant pour des variants de la fibronectine humaine et etude de leur expression apres transfection dans des cellules eucaryotes
Institution:
Paris 11Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
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Abstract FR:
Les fibronectines sont des glycoproteines (500 kda) presentes dans le plasma et dans les matrices extracellulaires. Elles sont impliquees dans la morphogenese, dans la reparation tissulaire et dans certaines pathologies. Ces proteines sont essentiellement des molecules adhesives permettant l'adherence et la migration des cellules normales et tumorales. Les etudes biochimiques ont permis d'identifier certains domaines fonctionnels des fibronectines, associes a des sites de fixation specifiques de macromolecules telles que l'heparine, le collagene, la fibrine, la gelatine. Cependant, il reste une large region silencieuse situee dans la partie centrale de la molecule et dont la/les fonctions ne sont pas connues. Les techniques de biologie moleculaire permettent d'approfondir l'etude des fonctions des domaines par la construction de variants avec des deletions successives dans la sequence totale de l'adnc de la fibronectine. La production de ces variants dans des cellules eucaryotes apres transfection permettra d'identifier de nouveaux domaines fonctionnels et d'affiner notre connaissance de ces proteines multifonctionnelles. Le travail presente dans cette these concerne la construction de vecteurs d'expression codant pour des variants de la fibronectine humaine et l'etude de leur expression apres transfection dans des cellules eucaryotes. Les arnm des fibronectines exogenes ont ete detectes par cartographie a la nuclease. S1 a partir des cellules cost, nih3t3, s180 et hela transfectees transitoirement avec la forme deletee des fibronectines. Les etudes par immunofluorescence ont mis en evidence l'expression de la forme deletee de fibronectines apres transfection dans ces differents types cellulaires. Les fibronectines exogenes deletees sont localisees dans le cytoplasme sous forme vesiculaire