Abstract FR:

Chez la levure, saccharomyces cerevisiae, plusieurs modeles de recombinaison homologue sont proposes suivant la nature de l'evenement initial: coupure simple-brin ou double-brin. La plupart des etudes moleculaires de sont en faveur d'une induction de la recombinaison par coupure double-brin. Tous les modeles de recombinaison en cours predisent l'existence d'adn heteroduplex comme intermediaire de recombinaison. Dans un premier temps, j'ai avons l'existence, par une approche moleculaire, d'adn heteroduplex au locus ade8 dans les spores issues d'une souche heterozygote ade8/ade8-18. Par ailleurs, nous avons developpe un nouvel outil pour induire in vivo une cassure double-brin enzymatique dans le genome nucleaire de levure. Nous avons montre que l'endonuclease d'origine mitochondriale i-scel pouvait etre active sur une cible nucleaire. Son action induit des evenements de recombinaison homologue dirigee qui dependent du produit du gene rad 52. Enfin, j'ai etudie les mecanismes, etudie la reparation par recombinaison homologue de plasmides linearises replicatifs ou non replicatifs introduits par transformation dans la levure. Nous avons analyse l'effet de la quantite d'adn transformant sur la nature des produits de transformation. Les resultats montrent que les evenements conduisant a des integrations multiples ne sont pas independants. Nous avons egalement compare les transformants obtenus avec les plasmides replicatifs aux recombinants induits par reparation de cassures double-brin generees in vivo par l'endonuclease ho. J'ai observe des differences quantitatives dans la nature des produits obtenus