Abstract FR:

La proteine de la membrane externe, p64k (64 kda), du meningocoque neisseria meningitidis est une des proteines vaccinantes potentielles, envisagees dans la preparation d'un vaccin anti-meningite contre le serogroupe b. Cette proteine (599 residus) appartient a la famille des flavoproteines : elle possede un domaine dihydrolipoamide deshydrogenase (dldh, 482 residus) relie par un segment flexible (81 residus) a un domaine lipoique (86 residus) du cote de son extremite n-terminale. La p64k est l'une des premieres dldh caracterisee avec un domaine lipoique. La connaissance de sa structure tridimensionnelle, par la diffraction des rayons x, doit permettre de localiser les regions impliquees dans la reponse immunitaire. Les methodes du remplacement moleculaire et du remplacement isomorphe ont ete employees parallelement pour parvenir a la resolution de la structure. Un premier modele partiel du domaine dldh a ete determine par remplacement moleculaire. Le probleme des phases a ete resolu par la methode du remplacement isomorphe en utilisant le tamm (compose a 4 atomes de mercure) a 0,6 mm et le xenon a l'etat gazeux (13 bar) pour obtenir des derives lourds. Ces donnees ont valide le premier modele du domaine dldh obtenu remplacement moleculaire, puis ont permis de l'ameliorer et d'achever sa construction. Ce modele a ete affine a 2,7 a de resolution. Les donnees de diffraction enregistrees sur un cristal congele a une temperature de 140\c ont permis d'affiner le modele du domaine dldh a 2,23 a de resolution. Le domaine dldh adopte un repliement similaire a celui des dldh de structures connues. Le centre catalytique, situe a l'interface de l'homodimere, est forme par le fad, un pont disulfure intrahelical (cys161-cys166) et un residu histidine (his572*). La structure du domaine dldh en presence du nad + a ete determine a une resolution de 2,6 a. Le determinant antigenique majeur du domaine dldh a ete localise dans ce modele. Il est situe a la surface de la proteine et est constitue d'une boucle de 10 residus flanquee de deux brins. Un complexe de type antigene-anticorps entre le fragment fab d'un anticorps monoclonal et le domaine lipoique a ete prepare pour etendre l'etude structurale au domaine lipoique de la p64k. Les premiers essais de cristallisation de ce complexe antigene-anticorps ont ete debutes.