Abstract FR:

L'interet porte au gene gus pour le reperage des cellules vegetales transformees, nous a conduit a examiner les possibilites de detection cytoenzymologique de la beta-glucuronidase, codee par ce gene, en microscopie electronique. La detection ultrastructurale du dix-indigo, produit final de l'hydrolyse du x-glu par cette enzyme, a ete possible en adaptant le test couramment utilise en microscopie photonique. La presence de br et de cl a ete recherchee par microanalyse x dans les microcristaux observes, seul le dix-indigo presentant a la fois ces deux atomes. Les limites d'utilisation de ce test ont ete definies grace a differents modeles transgeniques. Pour des tabacs 35s-gus avec ou sans presequence d'adressage mitochondriale de la beta-atpase ou de la mnsod, la compartimentation cellulaire a ete etablie par fractionnement et test mug. La localisation de l'enzyme ne correspondant pas avec celle du dix-indigo, une attention particuliere a ete portee sur les divers artefacts lies a la diffusion des produits intermediaires de la reaction et a la cristallisation en des sites non specifiques, particulierement en presence de lipides. Une approche immunocytochimique a alors ete tentee. Par test elisa, western blot et immunolocalisation, des anticorps non specifiques ont ete deceles dans les fractions anti-beta-glucuronidase du commerce les rendant donc inutilisables. En conclusion, l'attention a ete attiree sur l'ensemble des fausses localisations de la beta-glucuronidase pouvant etre rencontrees. Les limites d'utilisation du test gus ont aussi ete discutees