Contribution a l'etude du coronavirus enteritique bovin : identification des genes des glycoproteines he et s, et d'une proteine non-structurale ns2. analyse de leur role biologique et localisation d'un epitope immunodominant continu de s
Institution:
Paris 7Disciplines:
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Le coronavirus enteritique bovin (bcv) est un virus enveloppe caracterise par une double couronne de spicules formee par les proteines he et s. Son genome est constitue d'un long arn de 30 kb, de polarite positive. La sequence nucleotidique de 6700 nucleotides situee entre les genes p (polymerase) et orf5 (proteine non structurale) a ete etablie a partir de clones d'adnc. Ces resultats joints a l'analyse des arnm du bcv nous ont permis de definir les genes orf2, he et s en aval de la polymerase. S code pour une glycoproteine de 1363 aa (mm 150,7 kda) clivee en deux sous-unites s1 et s2. Nous avons exprime avec les vecteurs puex des fragments chevauchants du gene s et avons delimite sur 18 aa l'epitope de groupe lineaire s2a a l'extremite n terminale de s2. He est la seconde glycoproteine du bcv; longue de 424 aa (mm 42,5 kda), elle est codee par l'arnm3. La glycosylation de he n'est pas necessaire a sa dimerisation in vitro. La serine 40 et l'histidine 329 sont potentiellement impliquees dans le site catalytique esterase. He a ete exprimee de facon permanente en cellules vero. L'orf2 code pour une proteine non structurale ns2 (30,5 kda) par l'intermediaire de l'arnm2. Ns2 synthetisee en grande quantite sous forme d'une proteine hybride chez e. Coli a ete utilisee pour induire la synthese d'ac specifiques chez 4 souris. Elle a ainsi pu etre identifiee des 5 heures apres l'infection dans une experience en cycle unique. Sa regulation et sa synthese continue au cours du cycle apparaissent differentes de celles des proteines structurales