Abstract FR:

Cette these a eu pour double objectif de verifier dans quelle mesure le declin resolu dans le temps de la luminescence d'ions terbium pourrait permettre l'etude des fluctuations conformationnelles de proteines et de tenter de lever, par l'observation directe en temps reel du transfert d'energie aminoacide aromatique-terbium, les incertitudes qui pesaient sur la nature de son mecanisme. A cette fin, nous avons etudie trois proteines possedant un site calcium substituable par un ion terbium: la calmoduline, l'elastase pancreatique et la thermolysine. La premiere conclusion qui ressort de cette etude est la faible sensibilite de la duree de vie de la luminescence intrinseque des sondes terbium aux variations d'environnement, contrairement aux espoirs suscites par des travaux publies dont on montre qu'ils reposent sur des interpretations erronees. Ce travail presente, en second lieu, les premieres observations de transfert d'energie intraproteique acide amine aromatique-terbium resolu dans le temps. La lenteur des processus observes, qui se situent dans un domaine allant de quelques dizaines de microsecondes a quelques millisecondes, indique que c'est l'etat premier triplet excite d'un aminoacide aromatique donneur qui est implique dans le transfert. Ces resultats remettent en cause l'hypothese implicite, faite pour toutes les determinations de distance, d'un transfert de type forster se produisant exclusivement depuis l'etat excite singulet du donneur. En raison de la tres grande sensibilite de tous les mecanismes de transfert d'energie a la distance donneur-accepteur, l'etude de la luminescence sensibilisee resolue dans le temps s'est averee constituer un outil sensible a des changements conformationnels proteiques locaux