Abstract FR:

Les recepteurs de l'insuline et de l'igf-i (insulin-like growth factor-i) sont des recepteurs a activite tyrosine kinase qui, actives par l'insuline et l'igf-i, engendrent diverses reponses biologiques. La liaison du ligand induit l'autophosphorylation des recepteurs sur des residus tyrosine qui constituent des sites d'ancrage pour des molecules telles que les proteines irs (insulin receptor substrate). Ces substrats sont phosphoryles sur tyrosine par les recepteurs et interagissent avec d'autres molecules de la signalisation. Cette cascade d'interaction et d'activation de proteines produit les reponses cellulaires de l'insuline et de l'igf-i. Au cours de ma these, j'ai etudie certains evenements moleculaires precoces des voies de signalisation de l'insuline et de l'igf-i. Dans un premier temps, j'ai caracterise et compare les interactions de p52shc (src homology a/2 collagen), irs-1 et irs-2 avec les recepteurs de l'insuline et de l'igf-i. Nous avons montre que le domaine ptb (phosphotyrosine binding domain) de p52shc, localise en n-terminale de la proteine, est responsable de l'interaction avec le recepteur de l'igf-i via le motif npey contenant la tyrosine 950 phosphorylee du recepteur. Irs-1 et irs-2 interagissent avec le recepteur de l'insuline par l'intermediaire de leur domaine ptb au niveau de la tyrosine phosphorylee 960 du recepteur de l'insuline contenu dans un motif identique a celui du recepteur de l'igf-i. De plus, nous avons mis en evidence la presence sur irs-2 d'un nouveau domaine d'interaction avec le recepteur de l'insuline. Ce domaine est absent sur irs-1. Il est localise entre les acides amines 591 a 786 de irs-2. Puisque les tyrosines du domaine kinase du recepteur de l'insuline (tyr-1146, -1150 et -1151) sont requises pour l'interaction avec ce domaine, nous l'avons nomme domaine krlb pour kinase regulatory loop binding domain. Ce domaine contient sept tyrosines dont deux (tyr-624 et -628) sont importantes pour la liaison du recepteur. Finalement, nous avons montre que la phosphorylation sur tyrosine du domaine krlb par le recepteur provoque une diminution de l'interaction de irs-2 avec le recepteur. Ces resultats nous ont permis de suggerer que le domaine krlb de irs-2 joue un role dans le relargage de irs-2 par le recepteur et qu'il contribue a la difference de specificite de irs-1 et irs-2 dans l'action de l'insuline. Dans un second temps, nous avons recherche de nouveaux substrats du recepteur de l'insuline en criblant une banque d'adnc de placenta par la technique du double hybride dans la levure. Nous avons identifie le facteur de transcription stat 5b (signal transducer and activator of transcription). Nous avons montre que stat 5b interagit avec le recepteur de l'insuline, par son domaine sh2 via la tyrosine 960 phosphorylee du recepteur, et qu'il est phosphoryle sur tyrosine en reponse a l'insuline et l'igf-i. Stat 5b est alors capable de lier une sonde d'adn contenant le site de liaison de stat 5 et d'induire la transcription d'un gene rapporteur dependant du promoteur de la glucokinase hepatique en reponse a l'insuline. Cette activation est independante de jak2 (janus kinase). Ce travail a permis d'identifier une nouvelle voie de signalisation de l'insuline dans laquelle le recepteur de l'insuline est directement lie aux evenements nucleaires qu'il induit grace aux facteurs de transcription stat 5b.