thesis

Purification par immunoaffinite du complexe mitochondrial de la nad : ubiquinone oxydoreductase (complexe i) de l'embryon de ble (triticum aestivum)

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Jan. 1, 1996

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Le genome mitochondrial des plantes presente certaines caracteristiques qui le distingue des genomes mitochondriaux des animaux ou des champignons. Nous avons ainsi entrepris d'etudier le phenomene particulier d'edition des arn messagers mitochondriaux chez des especes vegetales choisies dans chaque grand groupe composant le royaume vegetal. Pour cela, nous avons compare les sequences de l'adn et de l'arn correspondant a un fragment du gene mitochondrial coxiii. Il est apparu que dans la limite des sequences analysees, le processus d'edition des arn messagers n'est present que chez les plantes terrestres. Par ailleurs, le complexe de la nadh: ubiquinone oxydoreductase (complexe i) de la chaine respiratoire mitochondriale est tres bien caracterise chez le buf (bos taurus) ou chez le champignon neurospora crassa tant au niveau biochimique que genetique. Il n'en est rien chez les plantes et nous avons entrepris de purifier ce complexe multienzymatique a partir de l'embryon de ble (triticum aestivum). Pour cela, une methode originale de purification par immunoaffinite a ete mise au point grace a la connaissance du gene mitochondrial nad9. Le produit de ce gene est une sous-unite du complexe i qui est localisee dans la partie hydrophile de l'enzyme. Des anticorps diriges contre la proteine nad9 ont permis l'isolement de ce complexe sur colonne d'immunoaffinite. Les resultats de ces experiences ont montre que le complexe i ainsi purifie presente 30 sous-unites pour un poids moleculaire estime a 900 kda. Cette technique nous a permis de contribuer a l'etude de mutants de nicotiana sylvestris obtenus a orsay et qui presentent le phenotype de la sterilite male cytoplasmique. Il nous a ete possible de montrer que les sous-unites nad1 et nad7 sont absentes du complexe i chez ces mutants. Ceci confirme les etudes genetiques effectuees dans le laboratoire d'orsay