Abstract FR:

La ca 2 +-atpase du reticulum sarco/endoplasmique (serca) catalyse le transport actif du ca 2 + du cytosol vers le reticulum. Cinq isoformes codees par trois genes etaient decrites. Nous avons isole et caracterise le gene serca3 murin afin de determiner s'il codait plusieurs isoformes et etudier la regulation de sa transcription. Nous avons montre par protection aux ribonucleases, sequencage et rt-pcr qu'il genere deux transcrits par un mecanisme d'epissage alternatif : serca3a et serca3b qui inclue un exon supplementaire en 3 du gene. L'expression tissulaire des transcrits serca3, determinee par rt-pcr, montre que seule serca3b est presente dans les cellules endotheliales arterielles, mais les deux isoformes sont coexprimees, a des niveaux variables, dans tous les autres tissus etudies : le rein, le poumon, l'intestin, la trachee, la rate, le thymus, le foie ftal et les plaquettes. 2,5 kb du promoteur et le debut du premier intron ont ete sequences et les sites consensus de fixation de facteurs de transcription ont ete determines. Le site d'initiation de la transcription a ete localise a 301 nucleotides en amont de l'atg par rt-pcr et extension d'amorce. Ce promoteur ne contient ni tata ni caat box mais une sequence riche en gc. Des deletions progressives du promoteur de 4 a 0,15 kb et l'intron 1 ont ete inserees en amont du gene codant la luciferase et transfectees transitoirement dans des cellules endotheliales exprimant serca3 (mobr204), des fibroblastes (10t1/2) et des myoblastes (c2c12) ne l'exprimant pas. L'activite du promoteur est systematiquement plus elevee dans les cellules endotheliales. Le promoteur minimum est constitue de 0,4 kb mais le maximum d'activite est atteint avec 0,75 kb, dans les trois types cellulaires. Les sequences plus en amont et l'intron 1 contiennent des sites represseurs, plus efficaces dans les cellules non endotheliales. Ce travail constitue la premiere analyse de l'activite transcriptionnelle du gene serca3 murin dans differents types cellulaires.