Interaction entre circuits de regulation chez aspergillus nidulans : etude fonctionnelle des mecanisme d'induction specifique et de repression catabolique du gene alca
Institution:
Paris 11Disciplines:
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Le gene alca est un des genes inductibles parmi les plus fortement exprimes chez a. Nidulans. Sa transcription est soumise a deux circuits de regulation : i) l'induction specifique en presence d'ethanol (ou l'inducteur gratuit, l'ethyl-methyl-cetone), effectue par l'activateur transcriptionnel alcr ; ii) la repression catabolique en presence de glucose par le regulateur crea. Cette repression se fait par un mecanisme de double blocage : crea reprime la transcription de l'activateur alcr et directement la transcription du gene alca. L'induction specifique par alcr et la repression catabolique par crea se font via leur fixation sur des sequences specifiques localisees dans une petite region de 150 pb tres proche du demarrage de transcription du gene alca les experiences de retard sur gel ont montre qu'alcr se fixe in vitro sur un seul site 5' ccgca/t 3'. L'analyse in vivo par des experiences de deletion et mutagenese des cibles d'alcr sur le promoteur d'alca a mis en evidence que i) l'activation d'alca est synergique ii) pour etre fonctionnels les sites d'alcr doivent etre repetes (soit de facon directe ou inverse) iii) la positions des cible b et c est cruciale pour l'activation transcriptionnel d'alca. Les resultats des expertiences in vitro et in vivo permettent d'envisager l'interaction d'un autre facteur avec la proteine alcr. Les experiences de deletion et mutagenese des sites crea sur le promoteur alca ont mis en evidence que i) parmi les sept sites identifies in vitro seul trois (a, b#1, b#2) sont impliques dans la repression du gene alca ii) la repression est assuree principalement par les sites b#1 et b#2 iii) la derepression du gene alca est totale, suggerant que crea pourrait etre le seul regulateur necessaire a la repression du gene alca. La derepression d'alca apres mutagenese des cibles crea est concomitante avec une surexpression de ce gene suggerant l'existence d'une competition entre les deux regulateurs pour la meme region promotrice.