Abstract FR:

Pour analyser les mecanismes des regulations transcriptionnelles qui implique la voie regulatrice dependant de l'ampc dans des neurones du snc, nous avons developpe une technique de transfert de genes basee sur l'utilisation de lipopolyamine. Au plan methodologique, nous avons montre que cette methode de transfection est applicable a des lignees cellulaires et a des neurones differencies du snc. De plus, par une etude comparative de differents milieux, nous avons montre que l'efficacite de transfection est fonction de la concentration et du nombre de charges des reactants, de la force ionique et de la presence d'ions divalents. Enfin, nous avons montre que le milieu nacl (150 mm) est le milieu de choix dans lequel doit s'effectuer la formation et la maturation du complexe, car il peut etre additionne du milieu de culture necessaire a chaque type cellulaire. Au plan physiologique, nous avons ainsi pu demontrer que, dans les grains du cervelet, l'activation des recepteurs beta adrenergique et de la crh conduit aux augmentations du taux d'ampc et de la transcription du proto-oncogene c-fos. Par l'utilisation de genes chimeres, nous avons pu etablir que l'augmentation de l'expression genetique fait suite aux activations de la pka et du facteur nucleaire creb. Ces deux effecteurs augmentent la transcription par l'intermediaire, d'au moins, trois elements regulateurs distincts. Ces elements, presents dans le promoteur du gene c-fos sont: l'element repondant a l'ampc (cre: tgacgttt), le sre (serum responsive element) et l'element fap (fosap1-like site). Enfin, nous avons montre que la voie regulatrice dependant de l'ampc est modulee par la concentration de calcium cytosolique libre. Une augmentation du calcium intracellulaire par activation des recepteurs ionotropes ou par augmentation de l'activite electrique exerce un effet stimulant sur la sequence regulatrice de type cre independamment de la pka ou du facteur nucleaire creb. Une reduction de la concentration de calcium libre potentialise les effets genomiques de la voie ampc en augmentant l'accumulation d'ampc donc de l'activite de la pka puis du facteur nucleaire creb. De ce fait, la variation de la concentration de ca#2#+ intracellulaire permet le passage d'un etat de regulation de type metabotrope (ca#2#+#i faible) a un etat de regulation mixte, metabotrope/ionotrope (ca#2#+#i eleve) ou les effets potentialisateurs du ca#2#+ traduisent l'activation de deux voies regulatrices distinctes