Mecanismes moleculaires et regulation de la transposition d'elements genetiques mobiles de drosophile marques par des genes indicateurs
Institution:
Paris 6Disciplines:
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Nous avons developpe un gene indicateur, hsp-neo#r#t, qui permet de detecter les evenements de retrotransposition in vivo dans des drosophiles transgeniques. L'element i est un line de drosophila melanogaster dont la transposition a forte frequence peut etre provoquee par un croisement dysgenique entre des males inducteurs possedant des elements i fonctionnels et des femelles reactives qui en sont depourvues. Nous avons etabli des lignees transgeniques pour un element i marque par hsp-neo#r#t. La mobilite de cet element a ete detectee par selection en milieu contenant de la geneticine. Dans les copies transposees obtenues, l'elimination de l'intron du gene indicateur par epissage demontre que la transposition de l'element i passe par l'intermediaire d'un arn. Nous avons montre que la transposition de l'element i peut generer, non seulement des duplications de la cible, mais egalement des deletions. Un modele rendant compte de ces donnees est propose. Un deuxieme gene indicateur pour la drosophile, hsp-lacz#r#t, concu pour detecter les evenements de retrotransposition par simple coloration enzymatique in situ a ete insere dans l'element i en deletant la majeure partie de sa deuxieme phase de lecture ouverte. L'element ainsi marque est capable de transposer dans des cellules de drosophile en culture, lorsqu'il est co-transfecte avec un vecteur d'expression contenant les deux phases de lecture ouverte de l'element i. Dans les souches inductrices, les elements i sont stables. L'analyse des lignees transgeniques obtenues a montre que les elements i deletes pour une grande partie de la deuxieme phase de lecture ouverte sont capables de reprimer l'activite des elements i. Ceci suggere que le determinant de l'etat cellulaire controlant cette activite est la premiere phase de lecture ouverte. Enfin, nous avons etabli des lignees transgeniques pour les transposons de type retroviral gypsy, copia et 412 marques et des cultures cellulaires derivees de celles-ci. Ces deux systemes devraient permettre d'etudier les mecanismes moleculaires et la regulation de la transposition de cette deuxieme classe d'elements classe d'elements mobiles de drosophile