Abstract FR:

Les hormones et les neuropeptides sont synthetises via des precurseurs de grande taille dans lesquels les sequences hormonales, potentiellement actives, ne representent qu'une faible part de la masse totale. Il est surprenant de constater que le reste de la masse (generalement plus de 60 a 90%) est constitue par des sequences de connexion qui bordent les fragments hormonaux. Le role de ces sequences de connexion demeure encore inconnu dans une large mesure, meme si plusieurs roles hypothetiques ont ete emis. En effet, ces sequences non hormonales pourraient jouer un role dans la maturation des precurseurs proteiques, etre responsables de l'adressage intracellulaire des prohormones vers la voie de secretion regulee ou bien encore, posseder une activite biologique. Mes travaux et mes projets de recherche ont pour but d'evaluer le ou les roles potentiels des peptides de connexion d'un precurseur biosynthetique modele: le precurseur de la thyroliberine (trh) de rat. La maturation post-traductionnelle du pro-trh dans l'hypothalamus est complete et engendre, outre 5 copies de trh, 7 peptides de connexion de 10 a 48 acides amines (ps1a, ps1b, ps2, ps3, ps4, ps5, ps6). Dans un premier temps, nous avons mis en evidence et caracterise des sites de liaison hypophysaires specifiques et a haute affinite pour l'un des peptides de connexion du pro-trh, le prepro-trh-(160-169) baptise du nom de ps4 (sfpwmesdvt). Ces sites de liaison, reveles a l'aide de la sonde #1#2#5i-tyr#0 ps4, pourraient etre responsable de l'effet biologique du peptide ps4, c'est a dire la potentialisation de l'effet de la trh sur la secretion antehypophysaire de thyrotropine (tsh). Nous avons montre que l'analogue tyr#0 ps4 constitue un ligand tres affin (ki 5 nm) et par consequent, nous avons utilise cet analogue dans des experiences de relation structure-activite afin de determiner les motifs structuraux conferant une liaison a tres haute affinite. La synthese d'une vingtaine d'analogues de tyr#0 ps4 nous a permis de montrer que l'extremite n-terminale et, en particulier la fonction -nh#2 du residu en position 0, joue un role essentiel dans l'interaction ligand-recepteur. L'extremite c-terminale intervient dans la stabilisation de cette interaction. Pour la premiere fois, nous avons demontre que ps4 et ses recepteurs sont largement distribues dans le systeme nerveux central et les tissus peripheriques, ce qui suggere pour ce peptide des fonctions physiologiques qui restent a definir. Dans un deuxieme temps, nous avons isole et sequence le peptide de connexion ps4 a partir d'un extrait acetonique d'hypothalamus de boeuf. La structure primaire du decapeptide isole est identique a celle du prepro-trh-(160-169) predite chez le rat. Ces resultats constituent la premiere evidence chimique de l'existence d'un peptide non trh provenant de la maturation post-traductionnelle du precurseur de la trh in vivo. Recemment, nous avons mis en evidence l'existence de sites de liaison specifiques pour le #1#2#5i-tyr#0 ps4 sur une lignee cellulaire provenant d'un neurogliome de rat (cellules c6). Un tel modele devrait nous permettre de caracteriser l'eventuel second messager ainsi que le systeme de transduction associe au recepteur du peptide potentialisateur de la trh (ps4). De plus, nous nous proposons de cloner par expression le recepteur de ps4 afin de determiner la nature de ce recepteur qui reste jusqu'a aujourd'hui inconnue