Polypeptides intrinsèques du tonoplaste bobTIP26 des cellules de chou-fleur (Brassica oleracea L. Var. Botrytis) : clonage de deux ADNc et expression dans les tissus sous contraintes hydriques
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Dans la perspective de mieux connaitre l'organisation fonctionnelle de la membrane vacuolaire (tonoplaste), nous avons étudié les protéines intrinsèques du tonoplaste de 26 KDA (ou bobTIP26) des cellules du méristème du chou-fleur (Brassica oleracea L. Var. Botrytis). Une banque d'ADNc a été construite dans le vecteur d'expression lambda-gt 11 à partir des cellules en cours de vacuolisation du méristème. Le criblage immunologique de la banque par un sérum polyclonal monospécifique dirige contre les polypeptides tonoplastiques bobTIP26 a permis d'isoler deux ADNc (C26-1 ET C26-2). Les séquences peptidiques putatives ont été déduites. Chacune d'elles contient la séquence signature des protéines de la famille MIP. Les séquences déduites qui correspondent respectivement aux protéines bobTIP26-1 et bobTIP26-2 sont très similaires entre elles (94%) et très similaires (90%) à celle de l'aquaporine GAMMA-TIP du tonoplaste d'arabidopsis. L’injection d'ARNc bobTIP26-1 dans des ovocytes de xenope induit le gonflement des ovocytes et suggère que la protéine bobTIP26-1 pourrait être impliquée dans le transport de l'eau. Les transcrits codant les protéines bobTIP26 ont été localisés par hybridation in situ. Ils sont particulièrement abondants dans les cellules vivantes associées aux éléments conducteurs (xylème) et dans les cellules du méristème. Dans les tissus soumis à des contraintes hydriques, l'abondance des transcrits est régulée. Les ARNm bobTIP26 et les polypeptides correspondants s'accumulent dans les tissus soumis à une dessiccation progressive. Il pourrait s'agir d'un mécanisme d'adaptation et/ou de défense des cellules confrontées a un déficit hydrique. Des phénomènes de vésiculisation intense ont été corrélés aux modifications des patrons d'expression. Une intégration fonctionnelle des réponses à l'échelle cellulaire devra être explorée