Abstract FR:

Les principaux facteurs limitant l'utilisation des oligonucleotides antisens en tant qu'agent therapeutique sont leur faible penetration cellulaire et leur transport intracellulaire qui ne permet pas l'acces a leur cible arn. Pour s'affranchir de ces limites, des vecteurs ont ete developpes mais la penetration et le devenir intracellulaire des oligonucleotides depend fortement du type de vecteurs utilises. Nous avons compare la capacite de differents vecteurs a faire penetrer un oligonucleotide marque par fluorescence dans les cellules. Il est apparu que la distribution intracellulaire de l'oligonucleotide vectorise depend de la phase du cycle cellulaire avec une localisation nucleaire favorisee en phase de division cellulaire. De plus, pour evaluer l'efficacite d'oligonucleotides vectorises et modifies nous avons developpe un systeme de criblage ex vivo. Ce systeme consiste a transfecter de facon transitoire deux genes rapporteurs et a mesurer leur expression proteique. L'un des genes est utilise comme cible de l'oligonucleotide antisens et l'autre comme controle de specificite et de toxicite. Nous avons ainsi obtenu une inhibition sequence specifique de plus de 70% avec un oligonucleotide contenant deux groupements phosphorothioates a chaque extremite et vectorise par un dendrimere de polyamidoamine. Nous avons egalement mis en evidence un mecanisme rnase h dependant grace a l'observation des deux fragments obtenus apres coupure de l'arn cible au niveau du site de fixation de l'oligonucleotide.