Abstract FR:

L'objectif de ce travail est l'etude en expression transitoire et stable de la partie codante du gene uida sous le controle de differents promoteurs: le promoteur de l'orf14 precede ou non des sequences enhancer du promoteur 35s. Le promoteur 35s auquel a ete integre les l. R. E. De la ssu (lre35s). Le promoteur 35s precede de tandems de 2,4 ou 5 enhancers du promoteur 35s. Le promoteur 35s est pris en reference. Cette etude a necessite: la mise en place d'une methodologie efficace de transfert pour la mesure de l'expression transitoire du gene uida apres electroporation de protoplastes. Differents parametres ont ete definis. L'optimisation a ete realisee par planification experimentale. Cette approche s'es revelee une technique efficace, et a ete appliquee, avec succes, aux protoplastes de colza. L'obtention de plantes transgeniques: elle a ete realisee par la culture de disques foliaires de tabac avec a. Tumefaciens. Les plantes transformees sont selectionnees pour leur resistance a la kanamycine. Le reperage des plantes exprimant le gene uida est realise par revelation histochimique puis dosage fluorimetrique. L'integration du gene uida a ete etablie par analyse moleculaire pour certaines plantes et la transmission a la descendance du gene nptii etudiee. La planification experimentale a permis d'augmenter d'un facteur 3 a 5 le niveau d'expression de la gus. En expression transitoire le promoteur de l'orf14 et le promoteur lre-35s conferent respectivement une activite gus tres inferieure ou peu differente de celle conferee par le promoteur 35s. Des resultats comparables sont retrouvees en expression stable