Abstract FR:

Le travail presente dans ce memoire est consacre a l'etude de la secretion proteique chez bacillus subtilis. La description du mecanisme de secretion proteique, en termes moleculaires, repose au moins en partie sur l'identification des etapes discretes cellulaires de ce processus. Cet objectif peut etre atteint grace a la caracterisation spatiale et temporelle des formes precurseurs de la proteine secretee completee par l'etude in vitro des reactions simulants les modifications que peut subir la proteine au cours de sa secretion. Deux enzymes secretes par ce microorganisme ont ete choisis comme proteines modeles, la levane saccharase et l'alpha-amylase. Un mecanisme de secretion a deux etapes a ete anterieurement propose pour la levane saccharase. J'ai contribue a l'identification des catalyseurs possibles de la deuxieme etape, etape cinetiquement limitante s'effectuant sur la face externe de la membrane et au cours de laquelle l'evenement de liberation de la proteine dans le milieu exterieur est etroitement couple a l'acquisition de la structure native resistante aux proteases. Avec l'alpha-amylase, j'ai entrepris la caracterisation des formes intermediaires cellulaires. Lorsque l'alpha-amylase est exprimee sous le controle de son propre promoteur amyri, aucune forme transitoire ne peut etre detectee. Cette recherche m'a conduit cependant a caracteriser une nouvelle amylase endocellulaire chez b. Subtilis. A un niveau de synthese plus eleve, obtenu en placant le gene amye sous le controle de sacr, j'ai identifie une forme precurseur transitoire, depourvue de peptide signal. Le temps de demi-liberation de cette forme est du meme ordre de grandeur que le temps de demi-reaction du repliement de la proteine in vitro. Les deux evenements exigent la presence de calcium. Ainsi, le processus de secretion de l'alpha-amylase et de la levane saccharase pourrait s'effectuer post-traductionnellement selon une sequence assez semblable de deux etapes discretes. L'efficacite de la seconde etape, cinetiquement limitante, couplee au repliement proteique pourrait dependre de la presence de catalyseurs de repliement sur la face externe de la membrane. La comparaison des proprietes de repliement de ces deux proteines revele des caracteristiques communes qui pourraient aider a definir un code interne de secretion des proteines chez b. Subtilis.