thesis

Etude de la composition lipidique de la membrane vacuolaire d'acer pseudoplatanus. Determination de la distribution transmembranaire de la phosphatidylcholine et de la phosphatidylethanolamine

Defense date:

Jan. 1, 1993

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Institution:

Besançon

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Chez les plantes superieures, la vacuole participe aux fonctions vitales de la cellule. Les fonctions de cet organite sont assurees principalement par la membrane vacuolaire (tonoplaste). Notre travail a eu pour objectif d'etudier la composition lipidique du tonoplaste de cellules isolees d'acer pseudoplatanus l. . Le tonoplaste renferme des phospholipides, des glycolipides et des lipides neutres qui representent respectivement 44,5%, 39,1% et 16,4% des lipides totaux. Les sterols, dont 75% sont sous forme glycosylee, constituent environ 1/3 des lipides du tonoplaste. Les lipides majeurs sont la phosphatidylethanolamine (pe), la phosphatidylcholine (pc), un ceramide monohexoside et les sterols glycosyles. L'acide palmitique (16:0) et l'acide linoleique (18:2) constituent 60 a 80% des acides gras des phospholipides. L'hydrolyse acide des glycolipides ne libere qu'un sucre: le glucose. L'etude des activites phospholipasiques associees au tonoplaste, realisee a partir de phospholipides radioactifs, a permis de mettre en evidence la presence de phospholipases a#1 et d. La phospholipase a#1 est associee a la face cytoplasmique de la vacuole et presente un ph optimum voisin de 6. Elle n'est pas calcium dependante mais presente une activite maximale en presence de ca#2#+. La determination de la distribution transversale de la pc et la pe dans le tonoplaste a ete realisee a l'aide de reactifs chimiques (trinitrobenzenesulfonate, fluorescamine) et des phospholipases a#2, c et d. Seule l'utilisation simultanee de la phospholipase a#2 et de la phospholipase c a permis de montrer que pe est approximativement 20% plus abondante dans le feuillet externe que dans le feuillet interne et que pc est distribuee d'une facon symetrique entre les deux feuillets