Abstract FR:

La poly-adp-ribosylation est une reponse de la cellule aux cassures de l'adn induites par les agents genotoxiques. En se fixant sur les coupures simple brin de l'adn, et a partir de nad#+ comme substrat, la poly(adp-ribose)polymerase (parp) catalyse la synthese de poly(adp-ribose). La parp est impliquee dans la reparation par excision de base. Elle est un facteur de survie jouant un role essentiel apres exposition de l'organisme aux agents alkylants et aux radiations ionisantes. Nos travaux de mutagenese aleatoire (avec selection de mutants inactifs) et de mutagenese dirigee du domaine catalytique de la parp113 (113 kda) humaine, ont permis d'identifier des acides amines essentiels soit pour la liaison au nad#+ (y896, y907), soit pour la liaison a l'adp-ribose (k903, y986, m890) ou encore pour la catalyse (e988, l713). La resolution de la structure tridimensionnelle de co-cristaux du domaine catalytique de la parp, a permis de definir le site de liaison au nad#+ et celui de la liaison a l'accepteur. Selon l'orientation prise par l'adp-ribose accepteur dans son site, le 2'oh ribose relatif a l'adenine (etape d'elongation), ou le 2'oh du ribose relatif au nicotinamide (etape de branchement) catalyse l'attaque nucleophile sur le carbone anomerique du ribose relatif au nicotinamide du nad#+ donneur. Le glutamate 988, strictement conserve parmi toutes les adp-ribosyltranferases, facilite la reaction en polarisant a la fois le donneur et l'accepteur. Ainsi, la parp possede un site commun ou la catalyse des etapes d'elongation et de branchement du poly(adp-ribose) ont lieu. Lors de la caracterisation de cellules derivees de souris deficientes en parp113, nous avons observe qu'elles etaient encore capable de synthetiser du poly(adp-ribose), suggerant l'existence d'une autre enzyme ayant une activite de poly-adp-ribosylation. Nous avons ainsi mis en evidence une isoforme de la parp de 72 kda (parp72), qui semble capable de lier l'adn presentant des coupures, et dont l'activite est induite par des agents alkylants et oxydants, tout comme la parp113. La parp72 de souris semble etre l'homologue des parp72 de mais et d'arabidopsis, possedant un domaine catalytique similaire a celui de la parp113, mais un motif different des doigts a zinc pour la liaison a l'adn.