Effets de la congélation et de la vitrification sur le tissu testiculaire pré-pubère murin : impact sur la différenciation in vitro des spermatogonies souches
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Abstract EN:
Survival of the young boy after cancer has been considerably improved. However, therapeutics (chemotherapy and radiotherapy) cause teratogenic effects on healthy tissues and especially on the testis. The freezing of this tissue is an essential prerequisite for preserving fertility. Cryopreservation of testicular tissue could thus be used to perform in vitro maturation in order to restore fertility. The aim of this thesis is the validation (slow freezing) and the development (vitrification) of fertility preservation protocols, allowing the structural and functional integrity of the spermatogonies of murine testicular tissues to be maintained. In vitro cultures of murine pre-pubertal testicular tissues were used to analyze the impact of several culture media on the in vitro proliferation and differenciation of murine spermatogonial stem cells (SCCs). Indeed, a culture medium supplemented with retinol (Rol) as well as an appropriate volume of testicular fragment beneficially influence the progression of the spermatogenesis. The Rol not only maintains the architectural integrity of the seminiferous tubules but also limit the formation of alterations in round spermatids. Finally, a proteomic study of the pathways implicated in apoptosis and autophagy allowed us to study the impact of freezing, culture system and culture medium on the first spermatogenesis wave. Cryopreservation and in vitro culture strategies developed in this work can be proposed in the framework of a human application.
Abstract FR:
La survie du jeune garçon après cancer a considérablement été améliorée. Cependant, les thérapeutiques (chimiothérapie et radiothérapie) engendrent des effets tératogènes sur les tissus sains et tout particulièrement sur le testicule. La congélation de ce tissu représente un préalable indispensable permettant une préservation de la fertilité. Le tissu testiculaire décongelé pourrait ainsi être utilisé afin d’effectuer une maturation in vitro en vue d’une restauration de la fertilité. Le travail de cette thèse a pour objet la validation (congélation lente) et la mise au point (vitrification) de protocoles de préservation de la fertilité autorisant un maintien de l’intégrité structurelle et fonctionnelle des spermatogonies souches de tissus testiculaires murins. Des cultures in vitro de tissus testiculaires pré-pubères murins ont permis d’étudier et d’améliorer l’impact de différents milieux de culture sur la différenciation des spermatogonies souches in vitro. En effet, un milieu de culture supplémenté en rétinol (Rol) ainsi qu’un volume approprié de fragment testiculaire influencent de façon bénéfique la progression de la spermatogenèse. Le Rol permet non seulement un maintien de l’intégrité architecturale des tubes séminifères mais également une faible formation d’altérations au niveau des spermatides rondes. Enfin, une étude protéomique des voies de l’apoptose et de l’autophagie a permis d’étudier l’impact de la congélation, du système de culture ainsi que du milieu de culture sur la première vague de la spermatogenèse. Les stratégies de congélation et de culture développées dans ce travail peuvent être proposées dans le cadre d’une application humaine.