Abstract FR:

La principale partie de ce travail porte sur l'étude du facteur SigD de C. Difficile et de son implication dans la régulation de l'autolyse, de la mobilité et de la production de ses deux facteurs majeurs de virulence, les toxines A et B. Nous avons pu montrer, par inactivation du gène sigD, que SigD régule positivement la mobilité de C. Difficile mais n'affecte pas, ou peu son autolyse. Le régulon global de SigD a été ensuite déterminé par une analyse transcriptonique en microarrays. Parmi les gènes sous-exprimés chez le mutant du gène sigD, nous retrouvons les gènes flagellaires tardifs, les gènes des toxines A et B et le gène de leur régulateur TcdR. Nous avons pu identifier des promoteurs SigD-dépendants notamment en amont des gènes de la flagelline FliC, de l'anti-SigD FlgM et deTcdR. De plus, nous avons prouvé que SigD se lie avec l'ARN polymérase pour démarrer la transcription de tcdR, dont il est un régulateur direct. Par ailleurs, nous avons identifié une séquence consensus propre au régulateur SigD chez C. Difficile. Enfin, nous avons déterminé le rôle antagoniste de FlgM, l'anti-SigD, dans la répression des gènes SigD dépendants. SigD s'avère être un régulateur positif et direct de la mobilité et de la synthèse des toxines chez C. Difficile. Une partie complémentaire du travail s'intéresse aux autolysines Acd et Cwp19 de C. Difficile. Des mutants simples des gènes acd et cwp19 ont permis de montrer que seule Cwp19 intervient dans l'autolyse de C. Difficile en présence du TritonX-100. Cette autolysine est impliquée dans la lyse à long terme chez C. Difficile. Un double mutant acd-cwp19 semble avoir le même profil autolytique que le simple mutant cwp19. La glucosaminidase Acd ne semble donc pas avoir une implication majeure dans l'autolyse de C. Difficile. Des analyses complémentaires en cours de réalisation permettront de déterminer l'activité enzymatique de l'autolysine Cwp19