Immunothérapie antitumorale : production de lymphocytes T spécifiques d’antigènes de tumeur au moyen de cellules présentatrices d’antigènes génétiquement modifiées
Institution:
Rennes 1Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
Genetic modification of human monocyte-derived dendritic cells (DCs) with tumor-associated antigen (TAA) cDNA sequences is a promising strategy for immunotherapy of cancer. As an alternative to the commonly used viral vectors, a nonviral gene transfer method based on the use of the lipophosphoramide transfection reagent KLN-5 was investigated. We first determined the optimum conditions for transfection. The NY-ESO-1 TAA coding gene was found efficiently transfected in DCs as shown by tumor antigen mRNA expression analysis. Antigen processing and presentation of the immunodominant epitope in the HLA-A2 context was demonstrated by specific activation of a NY-ESO-1 CD8+ T cell clone. A NY-ESO-1 specific CD4+ T clone activation was also observed but remains to be confirmed. In the second part of our work, artificial APC (AAPC) were used to stimulate NY-ESO-1 specific cytotoxic T cells (CTL). The CPAA are derived from mouse fibroblasts, retrovirally transduced to stably express a HLA-peptide complex, and the B7. 1, ICAM-1, and LFA-3. Stimulation experiments were performed on naive T cells. NY-ESO-1 specific CD8⁺ T cells were detected by tetramer staining when stimulated with the AAPC expressing NY-ESO-1. But we were not able to detect INF-γ production when CTL were stimulated with NY-ESO-1 expressing cells. In conclusion, in this work we have evaluated two T cell activation methods. The synthetic vector KLN5 represents an attractive nonviral agent to generate a T CD8⁺ and T CD4⁺ response against TAA, even if the ability to prime a naïve T cell response remains to be shown. And finally, AAPC are useful to study T cell activation and to induce antigen-specific T cells for clinical purposes.
Abstract FR:
L'immunothérapie par stimulation des lymphocytes T spécifiques d'antigènes de tumeur constitue une approche très prometteuse pour le traitement des cancers. Notre travail a porté sur la vectorisation de l'antigène de tumeur NY-ESO-1 dans les DC, à l'aide d'un vecteur synthétique du groupe des lipophosphoramides cationiques, le KLN-5. Nous avons dans un premier temps déterminé les conditions optimales de transfection. Nous avons montré que la protéine NY-ESO-1 est synthétisée dans les DC transfectées, clivée en peptides puis chargée sur les molécules de classe I et finalement présentée aux lymphocytes T de façon efficace. L'activation d'un clone spécifique de l'épitope de classe II a aussi été obtenue, mais reste à confirmer. Dans le seconde partie de notre travail, nous avons utilisé des cellules présentatrices d'antigène artificielles (CPAA), modifiées pour exprimer de façon stable un complexe HLA-peptide, ainsi que les molécules humaines de costimulation B7. 1, ICAM-1, et LFA-3, afin de stimuler in vitro des lymphocytes T cytotoxiques, spécifiques de l'antigène NY-ESO-1. Nous avons pu détecter la présence de lymphocytes T CD8⁺ spécifiques dans la population stimulée par les CPAA exprimant le peptide NY-ESO-1 par marquage tétramère. En conclusion, ce travail nous a permis d'évaluer deux méthodes en vue d'activer des lymphocytes T in vitro. L'utilisation de vecteurs synthétiques pour modifier génétiquement les DC semble être une voie prometteuse pour générer une réponse polyclonale T CD8⁺ et T CD4⁺ contre des antigènes de tumeurs. Enfin, les CPAA représentent un système alternatif de production de lymphocytes T spécifique d'antigènes de tumeurs à visée d'immunothérapie adoptive.