Abstract FR:

Pour comprendre les mecanismes d'hydrolyse et de reconnaissance des carraghenanes, la -carraghenase de p. Carrageenovora (33 kda) et la -carraghenase d'a. Fortis (53 kda) ont ete exprimees dans des souches d'e. Coli avec une etiquette d'histidines, sous leur forme native et marquees aux seleno-methionines. Ces proteines ont ete purifiees par chromatographie d'affinite et cristallisees en utilisant le polyethylene glycol comme agent precipitant. Leur structure ont ete resolues par la methode mad a trois longueurs d'onde en utilisant les proteines marquees aux seleno-methionines. Les modeles ont ete affines a 1,54 a de resolution pour la -carraghenase (r = 17. 8%, r l i b r e = 19. 3%) et 1,60 a pour la -carraghenase (r = 20. 7%, r l i b r e = 22. 3%). La -carraghenase adopte un repliement en sandwich , similaire a celui de la lichenase, seule proteine de la famille 16 de structure connue. Cependant cette proteine presente un site actif en tunnel, topologie observee uniquement dans les cellobiohydrolases, suggerant une adaptation la degradation endo-processive d'un substrat solide. La presence d'un -bulge dans le site actif eclaire d'un jour nouveau l'evolution du clan b des glycoside-hydrolases. La -carraghenase presente un cur en helice droite, avec deux domaines additionnels dans la region c-terminale. Les acides amines potentiellement impliques dans la catalyse et la reconnaissance du -carraghenane ont ete identifies. L'influence du nacl sur l'activite enzymatique est expliquee par la presence d'un ion sodium et un ion chlorure. La cinetique de degradation enzymatique du -carraghenase, suivie en solution par rmn et en phase solide par met, a montre que les -carraghenases agissent par inversion de configuration anomerique et selon un mecanisme endo-processif.