Abstract FR:

Le gene nifr4 est necessaire pour la fixation d'azote chez rhodobacter capsulatus. Ce gene a ete sequence. Sa sequence presente de fortes similitudes avec les produits des genes ntra de rhizobium meliloti, d'azotobacter vinelandii et de klebsiella pneumoniae qui sont des facteurs sigma alternatifs. Six souches nif#, mutees dans le gene nifr4, ont ete analysees par sequencage. Cinq de ces mutations correspondent a un codon stop. Dans la sixieme, la glycine 108 est substituee par un aspartate. Cette substitution provoquant un phenotype nif#, cette glycine est donc essentielle pour l'activite de nifr4. Le gene nifr4 a ete clone et exprime dans e. Coli et r. Capsulatus. Une proteine ayant une masse moleculaire de 46 kda correspondant a celle calculee d'apres la sequence nucleotidique a ete identifiee. Nous avons surexprime nifr4 dans un vecteur de fusion de genes de e. Coli. Une proteine dont la composition en acides amines correspond a la proteine fusion attendue a ete purifiee et a servi a preparer des anticorps. Ces anticorps reconnaissent une proteine de 46 kda, dans des extraits cellulaires de r. Capsulatus, qui correspondrait a la proteine nifr4 codee par le gene nifr4 chromosomique. Une fusion nifr4::lacz a ete construite pour etudier la regulation de l'expression de nifr4 dans r. Capsulatus. L'expression de nifr4 est regulee par l'ammoniaque et par l'oxygene, ainsi que par les genes nifa, nifr1, nifr2 et nifr4 de r. Capsulatus