Abstract FR:

Mon travail a visé à mettre au point un système permettant l'expression dans les chloroplastes d'une protéine à haute valeur ajoutée, de manière spécifique et contrôlée. Pour cela, la réalisation d'une double transformation (nucléaire et plastidiale) a été envisagée. Une première avancée dans ce domaine a été réalisée en 1994 par la mise en place d'un système impliquant l'ARN polymérase T7 (McBride et al. , 1994). L'originalité de mon travail réside en l'utilisation du système transcriptionnel propre au chloroplaste, en le re-programmant en quelque sorte, pour le forcer à transcrire, lorsque l'ordre lui en serait donné, un gène d'intérêt. La cible de cette re-programmation est le système transcriptionnel PEP et le moyen du re-programmation est un facteur sigma chimérique (hybride) ayant une spécificité de reconnaissance pour un promoteur absent du génome plastidial normal. Des plantes de tabac transplastomiques contenant la construction E- YFP reconnue par le facteur hybride après transformation plastidiale ont été régénérées. Elles ont été ensuite agro-infiltrées par la construction contenant le facteur sigma hybride. Des résultats préliminaires indiquent une faible expression du gène rapporteur dans des structures associées à des chloroplastes. D'autre part, afin de pouvoir tester in vitro les interactions du facteur sigma hybride avec la PEP core, un système de transcription utilisant l' ARN polymérase PEP a été mis au point.