thesis

Optimisation de la production de cartilage in vitro pour des études pharmacologiques de molécules anti-arthrosiques

Defense date:

Jan. 1, 2005

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Institution:

Lyon 1

Disciplines:

Directors:

Abstract EN:

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Abstract FR:

Dans ce travail, nous avons déterminé le meilleur protocole pour la préparation d'un tissu en ingénierie du cartilage afin d'étudier les effets potentiels anti-arthritiques et/ou anti-arthrosiques de molécules comme les insaponifiables d'avocat/soja (ASU). Pour cette étude nous avons utilisé des chondrocytes articulaires de veaux et une lignée de chondrocytes murins (MC615), respectivement ensemencés dans des éponges de collagène ou en culture en monocouche. Les cultures ont reçu ASU (1, 3 ou 10 µg/ml) tous les jours et/ou IL-1 (0,1 ; 0,25 ; 0,5 ; 1 ; 5 ou 20 ng/ml) pour 1 ou 3 jours. Pour les chondrocytes de veaux, nous avons sélectionné une culture de 15 jours en éponge de collagène ensemencée par 107 de cellules. Ce modèle montrait une prolifération cellulaire minimale, un dépôt de GAGs maximal et une haute expression de COL2A1, d'agrécanne et de COMP. En présence d'IL-1, nous avons observé une diminution de COL2A1, de l'agrécanne et de COL1A1 et une augmentation d'IL-1Ra, de TIMP-1, de MMP-1 (450 fois), MMP-3 (54 fois), MMP-13 (60 fois), ADAMTS-4 (54 fois) et ADAMTS-5 (10 fois). Au niveau protéique, une augmentation dose dépendante de la MMP-1 et de la MMP-13 a été détectée avec moins de 15% sous leurs formes actives. Le traitement par ASU n'a pas modifié l'expression des MMPs mais a permis d'inhiber l'activité de la protéine MMP-13 (zymographie 2D+DTT) par les chondrocytes de veaux activés via IL-1. Pour les cultures de MC615, nous avons observé un niveau d'expression de MMP-13 similaire et une légère augmentation de son activité avec IL-1 par rapport au contrôle. Le traitement par ASU, en présence d'IL-1, n'a pas modifié l'expression et l'activité de la MMP-13