Abstract FR:

Le travail presente constitue une premiere etape dans l'etude du role du ligand bifonctionnel c3b associe la toxine tetanique, sur la fonction d'appretement et de presentation de cet antigene par des clones b humains transformes par le virus d'epstein-barr, specifiques de la toxine tetanique, aux lymphocytes t. Dans une premiere partie, l'analyse en sds-page des fragments de c3b fixes sur les lymphocytes b indique que 60% de cette proteine est impliquee dans la formation de complexes covalents par pont disulfure avec des proteines membranaires et 40% dans des interactions non covalentes avec les recepteurs cellulaires du complement. L'implication de la cys1010 du thioester dans la formation des complexes covalents a ete confirmee apres alkylation de cet unique groupement sh libre par l'iodoacetamide. Lorsque ces cellules sont preincubees avec la toxine tetanique puis avec #1#2#5i-c3b, des complexes disulfure #1#2#5i-c3b-tt sont immunoprecipites a partir des lysats subcellulaires avec des antiserum contre c3 ou la tt. L'expression membranaire et la secretion dans les surnageants de culture d'une proteine reconnue par des anticorps anti-thioredoxine suggerent l'implication de cette enzyme dans la formation du disulfure. Dans une seconde partie, nous avons analyse le role de l'association covalente de c3b a la toxine tetanique, sur l'appretement et la presentation de la tt aux lymphocytes t, par ces clones b specifiques. Deux types de complexes c3b-tt ont ete utilises: des complexes disulfure ou des complexes ester prepares in vitro. L'analyse a ete faite en gel sds-page a partir de proteolysats obtenus apres endocytose de l'antigene in situ, ou par des fractions subcellulaires enrichies en lysosomes. Les resultats indiquent que les fragments de proteolyse de tt observes a partir de la tt ou de c3b-tt sont identiques. Des experiences de cinetiques revelent un effet retard de la proteolyse de la tt elle est associee a c3b. D'autre part, la presentation par des cellules b fixees de proteolysats de tt seule ou de c3b-tt obtenus a differents temps, montre que la production de peptides est maximale a 6 heures de traitement avec la tt, alors qu'elle est maintenue au bout de 24 heures avec les complexes. Ces derniers constituent un reservoir d'ag dans la cellule presentatrice et assurent une liberation graduelle de peptides immunogenes responsables d'une stimulation (10) de la proliferation des cellules th specifiques. Ces effets sont a relier a la stabilite de la liaison ester ou disulfure dans les compartiments subcellulaires, ainsi qu'au role chaperon de c3b. L'utilisation de cathepsines purifiees indique que cet effet protecteur de c3b resulte d'une susceptibilite differente pour les proteases intracellulaires de la tt seule ou associee a c3b