Abstract FR:

Une banque d'anticorps monoclonaux spécifiquement dirigés contre des épitopes du tonoplaste des cellules en différenciation du méristème inflorescentiel de chou-fleur (Brassica oleracea l. Var. Botrytis) a été construite. L'anticorps monoclonal TeM 106 qui est spécifiquement dirigé contre un polypeptide majoritaire (12%) du tonoplaste a été sélectionné. Le polypeptide reconnu par TeM 106 a été appelé bob TIP 106 pour signifier qu'il s'agit d'un polypeptide de 106 000 daltons intrinsèque du tonoplaste de Brassica oleracea l. Var. Botrytis. Le polypeptide bob TIP 106 est glycosylé et contient des résidus mannose ou glucose mais l'épitope est peptidique. Par immuno-microscopie, nous avons montré que bob TIP 106 est spécifiquement associé au tonoplaste et que l'épitope est localisé à sa face luminale. Bob TIP 106 a été solubilisé et séparé des autres constituants de la membrane par centrifugation en gradient de densité. Bob TIP 106 comigre avec la V-ATPase. Des immuno-précipitations croisées ont montré que bob TIP 106 et la V-ATPase sont solidaires et constituent vraisemblablement un complexe protéique dans le tonoplaste. La membrane des vésicules à clathrine contient la V-ATPase mais ne contient pas bob TIP 106. L'anticorps monoclonal TeM 106 a été utilisé pour repérer dans la banque d’ADNc de chou-fleur les clones producteurs de la séquence peptidique contenant l'épitope. Un insert de 2 400 pb a été isolé. Il s'hybride avec des ARNm de 3,2 kb susceptibles de coder le polypeptide bob TIP 106. Les microséquences peptidiques internes seront comparées aux séquences peptidiques putatives déduites des séquences nucléotidiques pour s'assurer de la validité du repérage immunologique. L'expression des gènes codant bob TIP 106 a été localisée dans les tissus du chou-fleur par hybridation. Les transcrits sont abondants dans les cellules du méristème. Nous avons montré que les transcrits putatifs bob TIP 106 s'accumulent dans les tissus en conditions de contrainte hydrique