Abstract FR:

Les recherches sur les mecanismes d'action des toxiques de guerre pour la mise au point de therapeutiques nouvelles contre l'intoxication organophosphoree connaissent des developpements importants. Les cholinesterases (ches), inhibees progressivement par les organophosphores (ops), subissent une reaction de dealkylation (mecanisme de vieillissement) qui empeche toute reactivation par les composes nucleophiles tels que les oximes. Les mecanismes de l'inhibition et du vieillissement etant encore imparfaitement connus, les traitements actuels ne sont pas satisfaisants. Aussi, l'etude des mecanismes reactionnels et des bases moleculaires de la stabilite de ces enzymes constitue un domaine essentiel pour la recherche de therapeutiques nouvelles de l'intoxication par les ops : reactivateurs des ches vieillies et mutants des ches capables de degrader les ops. La pression est une variable physique originale pour l'etude des mecanismes reactionnels des macromolecules biologiques. Recemment, les hautes pressions ont ete largement utilisees pour etudier les mecanismes catalytiques et la dynamique conformationnelle des enzymes. Nous avons etudie l'action combinee de la pression et de la temperature sur l'activite catalytique d'une cholinesterase modele, la butyrylcholinesterase (buche) humaine, afin de dissequer son mecanisme catalytique et determiner les bases de sa stabilite conformationnelle. Dans un premier temps, la modulation de l'activite de la buche sauvage et du mutant asp70gly en fonction de la pression et de la temperature a permis de mettre en evidence les changements d'hydratation et de conformation associes au fonctionnement de l'enzyme. Dans un second temps, l'analyse structurale et fonctionnelle a permis de construire le diagramme de phase p/t pour l'inactivation de la buche, de mettre en evidence des etats intermediaires impliques dans le processus de denaturation et de remanence de l'inactivation apres traitement.