Abstract FR:

Les oligonucléotides antisens agissent selon deux principaux mécanismes : ils induisent la dégradation de l'ARN messager par l'enzyme ribonucléase H (RNASE H), ou ils bloquent physiquement la machinerie ribosomale. Il a été montré que les oligonucléotides modifiés, n'induisant pas l'activité de la RNASE H, inhibent efficacement l'initiation de la traduction, lorsqu'ils sont dirigés contre la région 5 non traduite ou la région du codon d'initiation AUG de l'ARN messager. Par contre, ces oligonucléotides n'ont aucune activité quand ils sont dirigés contre la partie traduite de cet ARN. Seuls les hybrides covalents et les structures en triple-hélices conduisent à un arrêt de l'élongation de la traduction. Nous avons montré, en ciblant quatre régions différentes en aval du codon d'initiation du messager HA-RAS (12 e, 74 e, 128 e et 149 e codons), que les polyamides nucléiques (PNA) inhibent l'étape d'élongation de la traduction, lorsqu'ils forment des hybrides possédant 10 paires GC sur 13. Ces PNA agissent en bloquant la progression de la machinerie ribosomale. Cette inhibition n'est pas due uniquement à la très haute stabilité de l'hybride forme avec le tridécamère PNA (TM = 86\C). En effet des oligonucléotides phosphoramidates (PN) ou 2-o-methyl (2-o-me), dirigés contre le 12 E codon, forment également des hybrides très stables (TM = 78\C) mais n'inhibent pas l'élongation de la traduction. Le tridécamère PNA, dirigé contre la mutation ponctuelle du 12 E codon, discrimine le messager muté du messager sauvage. Les PNA ont été électroporés dans des cellules épithéliales humaines T24. Nous avons montré que l'expression de la protéine HA-RAS a été partiellement inhibée par les PNAS, dirigés contre les régions du 12 E et 74 E codon. Le tridécamère PNA, dirigé contre le 12 E codon du messager HA-RAS, a été couplé à un peptide basique (p-antennapedia, 43-58), qui augmente la pénétration cellulaire des molécules auxquelles il est conjugué. Des études préliminaires montrent que ces PNA inhibent presque totalement l'expression de la protéine HA-RAS