Abstract FR:

Les venins de serpent des familles de viperidae et crotalidae sont riches en protéinases à sérine de type chymotrypsine agissant sur l'hémostase. Dans le but d'améliorer les agents thrombolytiques actuels, nous avons réalisé l'étude du TSV-PA (trimeresurus stejnegeri venom plasminogen activator) qui active le plasminogène en plasmine au meme site de clivage que les activateurs du plasminog7ne humains (t-PA et u-PA). Dans un premier temps, nous avons détermine le rôle des positions 192 et 193 dans la spécificité du TSV-PA. Nos travaux montrent que le résidu 192 ne semble pas important dans la reconnaissance de substrat ou d'inhibiteur du TSV-PA. Par contre, le mutant f193g active le plasminog7ne avec une efficacité catalytique 10 fois supérieure a celle du TSV-PA. De plus, ce mutant est inhibe par les inhibiteurs de type Kunitz (BPTI) et de la famille des serpins (PAI-1, 1-antitrypsine et 2-antiplasmine) quand le TSV-PA ne l'est pas, suggérant un rôle central du résidu en position 193 pour la spécificité du TSV-PA. Dans une seconde partie, nous nous sommes intéressés a la résistance du TSV-PA aux serpins. Le PAI-1 interagit avec le t-PA par l'intermédiaire de la région 36 chargée positivement. L'absence de cette boucle sur le TSV-PA lui assure en partie la résistance au PAI-1 puisque l'insertion des residus charges donne lieu a un mutant inhibe par le PAI-1. De plus, le double mutant comportant cette insertion et la mutation f193g est inhibe aussi bien par le PAI-1 que l'est le t-PA. A l'heure actuelle, nos résultats ne permettent pas d'inscrire le TSV-PA dans une nouvelle génération d'agents thrombolytiques, mais confirment son utilité dans l'amélioration des agents thérapeutiques existants. En effet, la construction d'un mutant du t-PA comportant la mutation g193f ainsi que la neutralisation des charges positives de la vr1, pourrait aboutir a l'obtention d'un mutant du t-PA résistant aux serpins et ayant de ce fait une demi-vie plus enlevée in vivo.