Abstract FR:

Les neutrophiles constituent la premiere ligne de defense contre les pathogenes d'origine bacterienne ou fongique. Leur capacite a tuer les microorganismes au niveau de foyers d'infection depend pour une large part du fonctionnement d'un systeme enzymatique producteur d'ions sueproxyde o#2#-, le complexe nadph oxydase, forme d'un flavocytochrome b heterodimerique qui reside dans la membrane plasmique. Ce composant redox transporte les electrons du nadph vers l'oxygene via un fad et un heme de type b sous le controle de la proteine g monomerique geranyl-geranylee rac suite au transfert des proteines cytosoliques, p67phox, p47phox, p40phox. Le travail experimental presente dans ce memoire porte sur 1) les parametres moleculaires et topographiques relatifs a rac, pour une activation maximale de l'oxydase en milieu acellulaire: p47phox, p67phox et rac1 ont ete clonees et surexprimees dans le systeme d'expression cellules d'insecte/baculovirus puis purifiees et utilisees avec une preparation de membranes de neutrophiles pour etudier l'activation de la nadph oxydase. Le role de la geranyl-geranylation post traductionnelle de rac et de la nature du guanine-nucleotide fixe par rac a ete precise. 2) la localisation des zones d'interaction dans p47phox, p67phox et p40phox proteines riches en domaines sh3 et motifs polyproline lors de l'assemblage du complexe oxydase, grace a l'utilisation d'un systeme de clonage par interaction in vivo, le systeme double-hybride: l'emploi de differentes constructions impliquant les proteines p47, p67 et p40 entieres ou tronquees a conduit a localiser plusieurs sites specifiques d'interaction et a permis de construire un modele du complexe oxydase faisant apparaitre de facon coherente les assemblages des composants du complexe, ainsi que leur evolution au cours de l'activation