Production et métabolisme des 3-bêta-hydroxystéroïdes neuroprotecteurs : les dérivés 7-hydroxylés de la déhydroépiandrostérone et de l'épiandrostérone
Institution:
Paris, CNAMDisciplines:
Directors:
Abstract EN:
In Alzheimer'sdisease, a decrease in the levels of cytochrome P4501B1 (or CYP7B1) transcripts was demonstrated. This enzyme is responsible for the 7-hydroxylation of dehydroepiandrosterone (DHEA) and epiandrosterone (EpiA). On the other hand, neuroprotective effects were shown for 7α-and 7ß-hydroxylated derivatives of DHEA and EpiA. These data allow to consider a reduction of CYP7B1 protein concentration in Alzheimer's brain and a possible therapeutic application of 7α-and 7ß-hydroxylated derivatives of DHEA and EpiA in order to compensate such decrease in neurodegenerative disorders such as Alzheimer's disease. Our aims were first to produce a monoclonal antibody anti-CYP7B1 by DNA immunization, then to study the metabolism of 7α-hydroxy-DHEA, 7ß-hydroxy-DHEA, 7α-hydroxy-EpiA, 7ß-hydroxy-EpiA as well as of their precursors (DHEA and EpiA) in human liver and intestines for assessment of their putative per os administration. For that purpose, we biosynthesized these various steroids under [4-14C]-labeled form for use as substrates in the in vitro phase I metabolism of these steroids in human intestine microsomes and in human S9 fractions liver with NADPH, NADH, NADP+ or NAD+ supplementation. These works resulted in the production of a monoclonal antibody specific for the human cytochrome P4507B1. The D16-37 monoclonal antibody recognized well the CYP7B1 under its native form as well as under its denaturated form.
Abstract FR:
Dans la maladie d'Alzheimer, les taux d'expression de l'ARNm du cytochrome P4507B1 (ou CYP7B1), enzyme catalysant la 7α-hydroxylation de la déhydroépiandrostérone DHEA) et de l'épiandrostérone (EpiA), sont réduits. D'autre part, un rôle neuroprotecteur est désormais établi pour les dérivés 7α- et 7β-hydroxylés de la DHEA et de l'EpiA. Ces données permettent d'envisager une diminution de concentration protéique du CYP7B1 dans le cerveau de patients Alzheimer et une éventuelle application thérapeutique des dérivés 7α- et 7ß-hydroxylés de la DHEA et de l'EpiA pour compenser cette diminution dans des pathologies neurodégénératives telles que la maladie d'Alzheimer. Notre objectif premier a été de produire un anticorps monoclonal anti-CYP7B1 à l'aide d'une immunisation par l'ADNc. En parallèle, nous avons également souhaité étudier le devenir dans l'organisme de la 7α-hydroxy-DHEA, de la 7ß-hydroxy-DHEA, de la 7α-hydroxy-EpiA, de la 7ß-hydroxy-EpiA et de leurs précurseurs (la DHEA et l'EpiA) en vue de leur administration per os. Pour cela, nous avons au préalable biosynthétisé ces différents stéroïdes sous forme radiomarquée au carbone 14 (14C). Nous avons pu ainsi entreprendre l’étude in vitro du métabolisme de phase I de ces stéroïdes d’intérêt dans des microcosmes d’intestin humain et des fractions S9 de foie humain complémentés en NADPH, NADP+ ou NAD+. Ces travaux ont permis d’obtenir un anticorps monoclonal spécifique du cytochrome P4507B1 humain, le D16-37, reconnaissant aussi bien le CYP7B1 sous sa forme native que sous sa forme dénaturée.