Abstract FR:

La sous-unite catalytique du complexe c1 du systeme complementaire humain est un tetramere ca#2#+-dependant (c1s-c1r-c1r-c1s) constitue de deux proteases a serine modulaires homologues, c1s et c1r. La protease c1s (673 acides amines, pm 79800), activee par c1r a la suite de la fixation de c1q a un activateur, declenche la voie classique du complement, par proteolyse de ses substrats c4 et c2. La proteolyse limitee de c1s par la plasmine produit le fragment catalytique gammab (270-673) constitue de deux modules ccp (complement control protein repeat) contigus, 4 et 5 (environ 60 residus chacun), d'un segment intermediaire (15 residus) et d'un domaine protease a serine (251 residus). Le travail presente dans cette these se situe dans le cadre de l'etude des relations structure-fonction de la protease c1s et a pour objectifs principaux: (i) l'etude de l'assemblage de la region catalytique de c1s, (ii) l'etude de l'implication des modules ccp 4 et 5 non proteasiques dans la proteolyse de ses substrats naturels, c4 et c2. Dans un premier temps, nous avons elabore un modele tridimensionnel de l'agencement des modules ccp 4, 5, du segment intermediaire et du domaine protease a serine. Une deuxieme partie du travail a consiste a verifier les hypotheses emises a l'aide du modele 3d, selon lesquelles les deux modules ccp 4 et 5, non proteasiques, confereraient a la protease c1s, sa haute specificite vis-a-vis du substrat c4. Cette partie du travail a egalement ete focalisee sur l'etude des regions de c1s impliquees dans la reconnaissance du deuxieme substrats de c1s, c2, pour lequel nous n'avons aucune indication. Deux fragments tronques de la region catalytique gammab de c1s, correspondant a une deletion du module ccp 4 seul, ou des deux modules ccp 4 et 5, ont ete produits sous forme proenzyme, dans un systeme eucaryote, cellules d'insecte sf21/baculovirus, en utilisant le systeme bac-to-bac#t#m. Nous avons montre que le fragment 5-b est activable par c1r de la meme maniere que c1s intact. Nous avons egalement montre que les informations necessaires pour la proteolyse de c2 sont toutes contenues dans le fragment 5-b tandis que certains elements de reconnaissance de c4 sont contenus dans le module ccp 4