Abstract FR:

Quand ils phagocytent des micro-organismes, les neutrophiles actives produisent des quantites importantes d'ions superoxyde, grace a un complexe enzymatique appele nadph oxydase. Le transfert d'un electron, depuis le nadph, jusqu'a l'oxygene moleculaire serait assure par un cytochrome b, le cytochrome b#5#5#8, qui serait un flavocytochrome. Dans le but d'etudier les differents transporteurs d'electrons (heme, fad) qui contribuent a l'activite de production d'ions superoxyde, le cytochrome b#5#5#8 des granulocytes neutrophiles de lapin a ete purifie. Teste en systeme acellulaire, en presence de cytosol, le cytochrome b#5#5#8 purifie par ce protocole est le seul compose membranaire necessaire a la reconstitution d'une activite de production d'ions superoxyde. Des ions superoxyde etant obtenus sans qu'il soit necessaire d'ajouter de la flavine, la presence de flavine endogene sur le cytochrome a ete envisagee. Pourtant, le dosage de fad effectue dans les differentes fractions chromatographiques de la derniere etape de purification du cytochrome b#5#5#8, fait ressortir un pic d'elution du fad decale par rapport au pic d'elution de l'heme. Ces resultats conduisent donc a s'interroger sur le concept de flavocytochrome et sur la validite du systeme acellulaire, pour tester l'activite de production d'ions superoxyde. Au cours de la purification du cytochrome b#5#5#8, une autre hemoproteine (p-30) a ete mise en evidence, purifiee et partiellement caracterisee. Cette hemoproteine presente le meme spectre d'absorption que le cytochrome b#5#5#8. Pourtant, plusieurs de ses caracteristiques, comme le potentiel d'oxydoreduction et la sequence proteique partielle, ont permis de montrer qu'il s'agit d'un nouveau cytochrome b, n'ayant aucune identite de sequence avec le cytochrome b#5#5#8 des phagocytes ou d'autres cytochromes connus. La fonction physiologique de cette hemoproteine dans les neutrophiles n'est pas encore connue. Elle possede pourtant une localisation subcellulaire voisine de celle du cytochrome b#5#5#8, c'est-a-dire a la fois dans la membrane plasmique et dans la fraction granulaire. Apres activation de la cellule, une partie du cytochrome p-30 est transferee dans la membrane plasmique