Abstract FR:

Les relations structure-fonction de la colipase pancreatique ont ete etudiees par une approche immunochimique a l'aide de huit anticorps monoclonaux et des fractions d'anticorps polyclonaux separees sur peptides synthetiques immobilises. La reactivite des anticorps en elisa, l'immunoinactivation de l'activite lipase colipase-dependante et l'identification des complexes antigene-anticorps binaires et tertiaires par hplc (filtration sur gel) ont montre le role essentiel de la region centrale 50-60 et de la region n-terminale de la colipase dans la formation du complexe actif colipase-lipase a l'interface. La colipase a ete purifiee a partir de pancreas de porc. L'homogeneite des preparations a ete verifiee par sequencage, spectrometrie de masse, electrophorese et hplc en phase inversee. La colipase de porc a ete co-cristallisee avec la lipase pancreatique humaine en absence et en presence de lipides micellaires. Les sites de fixation de la colipase au lipide et a la lipase ont ete identifies dans le complexe dont la structure a ete resolue a 3 angstroms. Les regions 29-38, 50-60 et 70-86 interagissent avec le lipide (site lipide) et les regions 44-46, 65-67 et 89 s'associent au domaine c-terminal de la lipase. En presence de lipide, le volet (boucle 238-260) qui empeche l'acces a la triade catalytique de la lipase s'ouvre et s'associe a la region n-terminale de la colipase (6-25). La determination de la structure 3-d de la colipase par rmn confirme les resultats de la cristallographie et la position des cinq ponts disulfures 17-28, 23-29, 27-61, 49-69 et 63-87