Abstract FR:

La glutamate deshydrogénase hexamérique, une protéine très conservée, représente un très bon outil pour l'étude de l'évolution des espèces à travers celle des protéines. D'autre part, cette enzyme constitue chez les archaebactéries un modèle pour des études biochimiques et structurales de protéines extremophiles. Au cours de ma thèse, je me suis intéressée à ces deux aspects. Le gène de la glutamate deshydrogenase de halobacterium salinarium a été cloné, séquencé et sa transcription étudiée (détermination de la taille du transcrit et du site d'initiation, déduction des régions promotrices). Il s'agissait alors de la première séquence d'une glutamate deshydrogenase archaebacterienne. Une large étude phylogénétique utilisant des méthodes de distance ou de parcimonie a montré l'existence des deux familles de gènes paralogues qui constitue un excellent outil pour identifier la nature de l'ancêtre commun aux trois règnes du vivant. Nous avons obtenu un arbre phylogénétique avec racine, qui remet en question la position de la racine de l'arbre universel proposé par Woese. A travers la glutamate deshydrogenase de sulfolobus solfataricus dont nous avons amplifié le gène par pcr avec des oligonucleotides dégénérés, et celle de h. Salinarium, nous avons montré qu'il existe très peu de changements adaptatifs spécifiques à l'halophilie et à la thermophilie: quelques mutations seulement pourraient induire la thermostabilisation de protéines mesophiles