Abstract FR:

L'objet de cette thèse et l'étude de la régulation de l'activité de la protéine p53. Nous nous sommes plus particulièrement intéressés à la phosphorylation de p53 par la pkc in vitro et in vivo. Tout d'abord, nous avons présenté une méthode de purification de la protéine. Cette méthode utilise l'interaction calcium-dépendante de p53 avec la calciproteine s100b. L'interaction de p53 avec les calciproteines se traduit par l'inhibition de l'oligomerisation et la dissociation des oligomères de p53 ainsi que par l'inhibition de la phosphorylation in vitro de p53 par la pkc. Les sites de phosphorylation de p53 par la pkc et un domaine d'interaction avec les calciproteines ont été localisés dans la partie c-terminale de la protéine. La protéine purifiée présente une réactivité importante de ses groupements soufres et nous avons montre que l'oxydation de ces résidus est responsable d'une diminution de l'interaction de la protéine avec une séquence cible d'adn. Nous avons également montré que p53 lie l'adn sous forme de dimère et que la formation de complexes de plus hauts poids moléculaires est due à une addition de molécules supplémentaires sur le complexe dimere/adn preforme. L'étude in vivo, utilisant un ester de phorbol pour stimuler l'activité de la pkc, a montré que ce traitement est capable, au moins dans le cas de cellules fibroblastiques transformées par ras et une protéine p53 thermosensible, de stimuler le blocage des cellules en phase g1 du cycle cellulaire. Ce blocage s'accompagne d'une augmentation de la phosphorylation de la conformation sauvage de p53, d'une augmentation de la quantité de p53 nucléaire, d'une augmentation de l'interaction de p53 avec l'adn et de son activité transcriptionnelle. Ces résultats suggèrent que la voie de régulation dépendante de la pkc forme un mode de régulation important de l'activité cellulaire de p53