Adaptation de la cyanobacterie calothrix pcc 7601 a son environnement : caracterisation de rcad, un effecteur de la transcription implique dans la regulation de l'adaptation chromatique complementaire
Institution:
Paris 11Disciplines:
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Les cyanobacteries sont des procaryotes photosynthetiques qui ont developpe plusieurs mecanismes d'adaptation aux changements de l'environnement (lumiere et nutriments). La souche calothrix pcc 7601 est capable, en particulier, de moduler, en fonction de la longueur d'onde de la lumiere incidente, la composition en phycobiliproteines de son antenne, le phycobilisome, synthetisant : phycoerythrine (pe) en lumiere verte et phycocyanine-2 (pc2) en lumiere rouge. Ce phenomene, appele adaptation chromatique complementaire (acc), se caracterise par une regulation de l'expression des genes, essentiellement au niveau transcriptionnel. Celle-ci implique au moins deux facteurs de transcription : rcaa et rcad affines, respectivement, de p c p e b a, promoteur de l'operon cpeba, qui specifie pe, et de p c p c 2 celui de l'operon cpc2, qui specifie pc2. Afin de mieux comprendre l'acc, la proteine rcad a ete purifiee et microsequencee pour cloner le gene rcad. Le sequencage a montre la presence d'un gene, rcag, immediatement en aval. La proteine rcad a ete surproduite sous forme etiquetee his 6, ce qui a permis de confirmer la liaison de cette proteine a p c p c 2. Rcad native se lie aussi a p c p c 1 et p a p c 1, promoteurs d'operons codant pour la phycocyanine-1 et l'allophycocyanine. Un site unique de demarrage de transcription a ete cartographie et, par rt-pcr, l'existence d'un operon rcadg a ete demontree. Des etudes in silico ont permis de proposer que rcad et rcag, a l'exemple des proteines e2 et e1 des papillomavirus, interagiraient pour permettre l'activation des genes cibles. Un mutant rcad a ete construit par substitution allelique. Une mutation faux-sens a ete introduite dans rcad afin d'eviter un effet polaire sur rcag. L'analyse biochimique du phenotype de ce mutant a montre que le rapport pe/pc etait modifie. Les blots d'arn realises ont permis de voir que, lors d'un transfert des cellules de lumiere verte a rouge, la transcription des operons cpc2, mais aussi celle d'apc1 et de cpc1 etait affectee dans le mutant. Rcad jouerait donc un role plus general que precedemment envisage dans la regulation de l'expression des genes specifiant les phycobiliproteines, remettant en cause le modele simple prealablement propose pour l'acc.