Abstract FR:

Depuis la decouverte des archaea et leur classification en un troisieme domaine, de nombreuses etudes ont porte sur la comprehension de la biologie moleculaire de ces microorganismes. La replication de l'adn est un processus metabolique fondamental commun a tous les etres vivants impliquant l'action concertee de diverses proteines. L'adn polymerase et l'enzyme cle responsable de l'integrite genomique dont l'activite depend de la presence de deux facteurs de replication, le pcna (proliferating cell nuclear antigen), facteur de processivite et le rf-c (replication factor c), facteur de chargement du pcna. Le sequencage recent du genome de p. Abyssi a permis d'identifier les genes codant pour ces deux facteurs dont les sequences proteiques presentent des proprietes voisines de celles des eucaryotes (composition en acides amines, point isoelectrique). Le pcna de pab a ete utilise comme sonde nucleotidique pour rechercher son homologue dans le genome de t. Fumicolans. Les deux pcna issus de souches thermococcales (pab et tfu) ont presente une conservation en acides amines remarquables (86% d'identite). Les similarites les plus fortes entre pcna d'archaea et des eucaryotes ont ete retrouvees au niveau des elements de structure secondaire indiquant un aspect tridimensionnel probablement en forme d'anneau. Le clonage, l'expression, la purification et la caracterisation des deux pcna ont ete menes. Ces deux facteurs ont stimule l'activite de leur adn polymerase recombinante de type i. Egalement, le pcna de tfu stimule l'activite de synthese de l'adn polymerase de thymus de veau. Les deux sous-unites du rf-c de pab ont ete clonees et exprimees. La purification a homogeneite a ete realisee. Les etudes immunologiques ont revele que le site de liaison au pcna apparait entierement conserve. La caracterisation du rf-c de pab est actuellement a l'etude. La connaissance approfondie des fonctions des facteurs de replication de pab en presence des deux adn polymerases i et ii disponibles au sein du laboratoire permettra de construire un systeme de replication thermostable in vitro et de l'inclure dans des techniques liees a des applications biotechnologiques.