Abstract FR:

Dans cette these, nous decrivons plus particulierement la regulation des genes chez h. Influenzae etudiee par mutagenese dirigee de gene regulateur de reponse a deux composants et la caracterisation plus specifique de l'un de ces mutants, montrant une diminution de virulence dans un modele animal. Ce mutant, arca, est hypersensible au serum humain, plus particulierement au complement. Certains membres du regulon arca ont ete identifies pour mieux comprendre les bases moleculaires du phenotype d'hypersensibilite au serum. Une approche plus generalisee a aussi ete entreprise grace a une technique relativement nouvelle nommee proteomics. Cette methode a ete utilisee pour comparer les profils d'expression des proteines de souches virulentes et non virulentes de h. Influenzae cultivees in vitro (en milieu synthetique). Des differences importantes ont ete detectees. Neanmoins, comme les genes de virulence ne sont pas toujours exprimes in vitro, ces memes souches ont aussi ete analysees dans differents modeles in vivo. Pour cela, j'ai developpe une technique d'immunopurification permettant l'isolement rapide des bacteries a partir de milieux complexes comme le sang et en quantite suffisante pour permettre une analyse des proteines en gel d'electrophorese a deux dimensions. Finalement, la phagocytose et la survie des bacteries dans les macrophages alveolaires humains ont ete etudiees pour essayer de comprendre les evenements qui precedent immediatement l'invasion des bacteries dans la circulation sanguine.